一叶兰和老虎须的快速繁殖及多倍体资源的创建

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一叶兰和老虎须是重要的观赏植物,具有极高的观赏价值和经济价值,市场前景广阔。多倍体育种是观赏植物育种的重要方法,但迄今国内外未见一叶兰和老虎须多倍体育种研究报道。组织培养快速繁殖是观赏植物种苗生产的重要方法,但有关一叶兰和老虎须快速繁殖的研究报道较少。本研究以一叶兰嫩芽和老虎须试管苗的叶片和叶柄为材料,研究了一叶兰和老虎须的快繁技术,在此基础上,利用秋水仙素处理其中间繁殖体进行多倍体资源创建。主要研究结果如下:   1.基本培养基、放置方式、叶片大小、外源激素、柠檬酸和活性炭对一叶兰愈伤组织的诱导有显著影响。将一叶兰叶片切成0.30cm2大小切片水平接入1/2MS+TDZ3.00mg·L-1+NAA0.10mg·L-l+柠檬酸0.1g·L-1的培养基上培养,愈伤组织的诱导率最高,为31.25%。将愈伤组织接种到相同培养基上继代培养形成带芽愈伤组织块。   2.培养方式对一叶兰愈伤组织芽分化影响显著,固液交替培养有利于愈伤组织块的芽分化;愈伤组织块不切分比对半切分的芽分化率高;TDZ浓度为3.00mg·L-1时,芽分化率最高,为17.78%:从第五到第八次继代,芽分化率逐渐增高。   3.NAA和活性炭浓度对一叶兰生根壮苗有一定的影响。NAA为1.20mg·L-1时生根率最高,为21.22%;培养基中添加活性炭1.00g·L1-时生根效果最好,生根率达39.26%,平均根数为4.13。栽培基质对一叶兰试管苗移栽没有显著影响。但采用进口水草移栽后150d,新叶率高,为50.00%,且盆栽苗生长更健壮,出根多。   4.秋水仙素处理明显抑制一叶兰芽分化,提高死亡率,在试验浓度范围内,秋水仙素浓度越高,死亡率越高。0.03%~0.05%秋水仙素处理一叶兰愈伤组织块均能诱导出多倍体,0.05%秋水仙素处理3d,多倍体诱导率最高,为36.36%。   5.采用改良压片法进行根尖染色体鉴定。结果发现,未经秋水仙素处理的再生植株根尖染色体数均为2n=2x-38,是二倍体,而经秋水仙素处理后的部分再生植株染色体数为2n>38,表明是多倍体。   6.基本培养基、外植体类型、外源激素、光照强度、外植体种类及放置方式对老虎须愈伤组织诱导有显著影响。将叶片垂直接种到1/2MS+6-BA1.0mg·L-1+NAA0.02mg·L-1培养基上,在4μmol·m-2S-1光照强度下培养,愈伤组织的诱导率为66.67%;而将叶柄水平接种到上述培养基上,在28μmol·m-2S1-光照强度下培养,诱导率为68.89%。将愈伤组织接种到相同培养基上继代培养形成带芽愈伤组织块。   7.接种愈伤组织块的块数对老虎须芽分化有显著影响,在1/2 MS+6-BA1.0mg·L-1+NAA0.02mg·L-1培养基中培养,每瓶接种3块,平均芽分化率最高,为88%。在1/2MS+NAA0.5mg·L-1+AC0.2g·L-1培养基上,老虎须平均根分化数为6.0条/株。   8.在0.03%~0.04%秋水仙素处理中,老虎须丛芽的死亡率随处理浓度的提高、处理时间的延长和继代次数的增加而逐渐升高。   9.采用改良压片法进行老虎须茎尖染色体鉴定。结果发现,未经秋水仙素处理的茎尖染色体数均为2n=2x=16,是二倍体,而经秋水仙素处理后的茎尖染色体数为2n>16,表明是多倍体。   通过上述研究,建立了一叶兰和老虎须的快繁技术体系、一叶兰的多倍体诱导和鉴定技术体系,获得了一叶兰多倍体资源,为进一步开展一叶兰和老虎须的新品种选育和繁育工作奠定了基础。
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