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G蛋白偶联受体(GPCR)是一类七跨膜蛋白,是最大的蛋白超家族之一,其介导的信号传导参与多种生理过程。G蛋白偶联受体在视觉、嗅觉、味觉等感觉系统中发挥重要作用；事实上,视觉受体、嗅觉受体以及部分味觉受体都是G蛋白偶联受体。但迄今为止我们对G蛋白偶联受体在听觉系统中的作用所知甚少。在本论文中,我们首先利用RT-PCR系统检测了部分GPCR在小鼠耳蜗组织中的表达情况,结果显示多个GPCR的mRNA在小鼠耳蜗组织中表达,其中包括Vlgr1 (Very large G protein-coupled receptor 1)。Vlgr1是目前已知最大的G蛋白偶联受体,其mRNA长达19kb,编码6300多个氨基酸。Vlgr1蛋白在毛细胞听纤毛的根部表达,参与听纤毛踝连接(Ankle link)的形成。Vlgr1基因突变可以引起Usher综合症(感觉神经性耳聋和色素性视网膜炎)以及癫痫。尽管Vlgr1研究已经取得了很多的进展,但Vlgr1蛋白在毛细胞中的作用机制,尤其是介导信号传导的过程和由基因突变所引发疾病的机制仍需要更进一步的研究。为了深入探讨Vlgr1在听觉系统中的功能,首先我们试图利用酵母双杂交筛选在内耳中与Vlgr1相互作用的蛋白,结果表明Vlgr1有自激活效应,不能进行酵母双杂交筛选。Vlgr1含有EAR重复序列,该序列可能在介导蛋白结合过程中发挥重要作用。目前已知含有EAR重复序列的蛋白有六个,除了Vlgr1之外,还有Tspear和LGI1-4。我们利用免疫共沉淀实验验证这些蛋白的EAR重复序列之间是否存在相互作用,结果表明Vlgr1的EAR重复序列有强烈的同源二聚化倾向,在细胞中过表达后以同源二聚体的形式存在。为了在动物水平深入探讨Vlgr1在听觉系统中的生理功能,我们从TheJackson Laboratory引入了Vlgrl基因敲除小鼠。目前我们已经对小鼠进行了基因型鉴定,接下来我们会利用Microarray和蛋白质谱的方法去分析Vlgr1基因敲除小鼠内耳组织中RNA和蛋白表达的差异,从而筛选可能的Vlgr1下游调控基因。