【摘 要】
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实验一:基于网络药理学探讨益气通络方治疗脑缺血再灌注损伤的作用机制目的:借助网络药理学,预测益气通络方治疗脑缺血再灌注损伤（Cerebral ischemia reperfusion injury,CIRI）的作用机制。方法:利用中药系统药理学数据库和分析平台、化源网、化学专业数据库检索益气通络方各药物的化学成分和作用靶点,通过GeneCards、OMIM数据库查询CIRI对应的疾病基因,借助ST
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实验一:基于网络药理学探讨益气通络方治疗脑缺血再灌注损伤的作用机制目的:借助网络药理学,预测益气通络方治疗脑缺血再灌注损伤（Cerebral ischemia reperfusion injury,CIRI）的作用机制。方法:利用中药系统药理学数据库和分析平台、化源网、化学专业数据库检索益气通络方各药物的化学成分和作用靶点,通过GeneCards、OMIM数据库查询CIRI对应的疾病基因,借助STRING平台和Cytoscape软件构建蛋白质间相互作用网络（PPI）;并使用metascape数据平台对两者进行GO和KEGG分析,预测益气通络方治疗CIRI的可能机制与通路。结果:化合物-靶点网络包含179个相应靶点,关键靶点涉及Src、MAPK3、MAPK1、Akt1、PIK3CA、EGFR、VEGFA等。GO功能富集分析得到347个条目（P＜0.01）,其中生物过程（BP）175个,细胞组成（CC）99个,分子功能（MF）73个。KEGG通路富集筛选得到161条信号通路（P＜0.01）,涉及PI3K/Akt、VEGF、Apoptosis、MAPK信号通路等。结论:本研究揭示了益气通络方对改善CIRI可能存在的有效成分和潜在作用靶点,为其进一步的开发和后续研究打下了基础。,实验二:基于PI3K/Akt通路探讨益气通络方调控神经细胞氧化应激损伤的机制目的:研究益气通络方含药血清对过氧化氢（H2O2）诱导PC12细胞氧化损伤的保护作用。方法:①选取SPF级健康SD雌性大鼠20只,随机分为空白组及益气通络方组。分别使用生理盐水及益气通络方灌胃7天,后腹主动脉取血离心制备空白血清及含药血清。②体外培养PC12细胞,随机分为对照组、模型组、空白血清组、益气通络方含药血清组、PI3K抑制剂组、益气通络方含药血清+PI3K抑制剂组。除正常组外,H2O2体外诱导构建PC12细胞氧化应激损伤模型。试剂盒检测乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）含量和细胞内超氧化物歧化酶（SOD）活力及活性氧（ROS）分布水平。蛋白免疫印迹法（Western blot）检测p-PI3K、p-AKT、AKT、Bax、Bcl-2蛋白表达水平。结果:选择600μmol.L-1 H2O2刺激4h作为氧化损伤造模条件。①与正常组相比,模型组LDH、MDA含量增高（P＜0.01）,SOD活力降低（P＜0.01）,ROS细胞内分布增加。与模型组相比,益气通络方含药血清组LDH、MDA含量降低（P＜0.01）,SOD活力增高（P＜0.01）,ROS细胞内分布减少。与益气通络方含药血清组相比,添加PI3K抑制剂后LDH含量升高（P＜0.01）,SOD活力降低（P＜0.01）,MDA含量升高,ROS细胞内分布增加。②与正常组相比,模型组p-PI3K、p-Akt/Akt降低（P＜0.01）,Bax/Bcl-2增高（P＜0.01）。与模型组相比,益气通络方含药血清组p-PI3K、p-Akt/Akt增高（P＜0.01）,益气通络方含药血清能下调Bax/Bcl-2。与益气通络方含药血清组相比,加入PI3K抑制剂会显著抑制p-PI3K、p-Akt表达（P＜0.01）,增高Bax/Bcl-2,促进细胞凋亡。结论:益气通络方能上调PI3K/Akt信号通路,促进抗凋亡蛋白表达,抑制细胞凋亡途径,减轻氧化应激反应,发挥细胞保护作用,延缓CIRI进展。
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