论文部分内容阅读
目的:探讨硬脂酸（Stearic acid,SA）在原发性痛风炎症反应和氧化应激反应中的作用。方法:1.采集3例急性期痛风患者（AG）、3例间歇期痛风患者（IG）、3例健康对照者（HC）的外周静脉血,分成2ml/管,采用SA、乙醇刺激,分别为空白对照组、200μmol/LSA 组、400μmol/LSA 组、600μmol/LSA组、800μmol/L SA组和0.25%乙醇组、0.50%乙醇组、0.75%乙醇组、1.00%乙醇组。置于含5%CO2的37℃孵箱孵育6小时后采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测AG、IG、HC组的外周血单个核细胞（PBMCs）中IL-1βmRNA表达,酶联免疫吸附实验（ELISA）检测AG、IG、HC组的血浆IL-1β蛋白表达水平,WST-8法检测AG、IG、HC组的血浆总SOD、SOD1、SOD2酶活性。2.采集4例AG、4例IG、4例HC的外周静脉血,分成2ml/管,采用 PBS、尿酸盐（MSU）、SA、MSU+SA 刺激,分别为 50μg/ml MSU组、100μg/ml MSU 组、150μg/ml MSU 组、200μmol/LSA 组、400μmol/L SA 组、600μmol/L SA 组、50μg/ml MSU+200μmol/L SA 组、50μg/ml MSU+400μmol/L SA 组、50μg/ml MSU+600μmol/L SA 组、100μg/ml MSU+200μmol/L SA 组、100μg/ml MSU+400μmol/L SA 组、100μg/ml MSU+600μmol/L SA 组、150μg/ml MSU+200μmol/L SA 组、150μg/ml MSU+400μmol/L SA 组、150μg/ml MSU+600μmol/L SA 组。置于含 5%CO2的37℃孵箱孵育6小时后采用RT-qPCR检测AG、IG、HC组的PBMCs 中 IL-1βmRNA 表达,ELISA 检测 AG、IG、HC 组的血浆 IL-1β蛋白表达水平,WST-8法检测AG、IG、HC组的血浆总SOD、SOD1、SOD2酶活性。3.采用SPSS 23统计软件分析,临床资料及实验室指标的多组间比较采用单因素方差分析,各组间两两比较采用最小显著差数法（LSD）。析因设计的实验资料,多组间比较采用多因素方差分析,各组间两两比较采用LSD法,表达量组间分析采用配对t检验。结果以均数±标注差（x±s）表示,以P＜0.05为差异有统计学意义。结果:1.AG组和IG组UA、TG、TC、LDL均显著高于HC组（P＜0.05）,AG组CRP显著高于IG组和HC组（P＜0.05）。2.在乙醇和SA刺激实验中,AG、IG、HC组外周静脉血分别经0.00%、0.25%、0.50%、0.75%、1.00%5 个浓度乙醇刺激,在 AG 组,5个不同浓度乙醇组间血浆IL-1β水平有统计学差异（P=0.016）,1.00%乙醇组血浆 IL-1β水平大于 0.00%、0.25%、0.50%、0.75%乙醇组（P=0.007、P=0.003、P=0.005、P=0.010）,在IG、HC组,5个不同浓度乙醇组间血浆IL-1β水平均无统计学差异（P＞0.05）。在AG、IG、HC组,5个不同浓度乙醇组间IL-1βmRNA转录水平、血浆总SOD活性、SOD1活性和SOD2活性均无统计学差异（P＞0.05）。AG、IG、HC组外周静脉血分别经 Oμmol/L、200μmol/L、400μmol/L、600μmol/L、800μmol/L 5 个浓度SA 刺激,在 AG 组,800μmol/L SA 组血浆 SOD2 活性大于 600μmol/L SA组（P=0.047）。在 IG 组,400μmol/L SA 组 IL-1βmRNA 转录水平大于Oμmol/LSA 组（空白对照组）、800μmol/LSA 组（P=0.046、P=0.037）,800μmol/L SA 组血浆总 SOD 活性大于 200μmol/L SA 组（P=0.021）。在HC组,800μmol/L SA组血浆IL-1β水平大于200μmol/L SA组（P=0.038）,600μmol/L SA 组、800μmol/LSA 组血浆 SOD2 活性小于0μmol/L SA组（P=0.013、P=0.021）。不同浓度乙醇组和对应SA组（0.25%乙醇组和200μmol/LSA组、0.50%乙醇组和400μmol/LSA组、0.75%乙醇组和600μmol/LSA组、1.00%乙醇组和800μmol/LSA组）比较,在AG、IG、HC组,IL-1βmRNA转录水平、血浆IL-1β水平、血浆总SOD活性、SOD2活性均无统计学差异（P＞0.05）,在AG、HC组,血浆SOD1活性均无统计学差异（P＞0.05）,在IG组,400μmol/LSA组血浆SOD1活性小于0.50%乙醇组（P=0.024）。3.在MSU和SA刺激实验中,AG、IG、HC组外周静脉血分别经0μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、150μg/ml 4 个浓度 MSU 刺激,在 AG、IG、HC组,4个不同浓度MSU组间IL-1βmRNA转录水平有统计学差异（P=0.000、P=0.000、P=0.001）。在 AG、IG、HC 组,50μg/ml MSU组、100μg/ml MSU 组、150μg/ml MSU 组 IL-1βmRNA 转录水平均大于0μg/ml MSU 组（空白对照组）（P=0.001、P=0.000、P=0.003 和P=0.016、P=0.000、P=0.000及P=0.002、P=0.001、P=0.001）。50μg/ml MSU 组、100μg/ml MSU 组、150μg/ml MSU 组 3 个组间上调 IL-1βmRNA 转录水平比较,在 IG 组,100μg/ml MSU 组、150μg/ml MSU 组大于 50μg/ml MSU组（P=0.030、P=0.000）,150μg/ml MSU 组大于 10Oμg/ml MSU 组,但无统计学差异（P＞0.05）,在AG、HC组均无统计学差异（P＞0.05）。AG、IG、HC 组外周静脉血分别经0μmol/L、200μmol/L、400μmol/L、600μmol/L 4个浓度SA刺激,在AG、IG、HC组,4个不同浓度SA组间IL-1βmRNA转录水平无统计学差异（P＞0.05）。在AG、IG、HC组,不同浓度SA与MSU共刺激对IL-1βmRNA转录未见统计学交互作用（P＞0.05）。AG、IG、HC 组外周静脉血分别经0μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、150μg/ml 4个浓度MSU刺激,在AG、IG、HC组,4个不同浓度MSU组间血浆IL-1β 水平有统计学差异（P=0.000、P=0.000、P=0.000）。在 AG、IG、HC 组,50μg/ml MSU 组、100μg/ml MSU 组、150μg/ml MSU 组血浆 IL-1β水平均大于 Oμg/ml MSU 组（P0.005、P=0.000、P=0.000 和P=0.021、P=0.000、P=0.000 及P=0.019、P=0.000、P=0.000）,增加血浆 IL-1β 水平比较,在 AG、IG、HC 组均是 150μg/ml MSU 组＞100μg/ml MSU组＞50μg/ml MSU组（P均＜0.05）。AG、IG、HC组外周静脉血分别经Oμmol/L、200μmol/L、400μmol/L、600μmol/L4 个浓度 SA 刺激,在 AG、IG组,4个不同浓度SA组间血浆IL-1β水平有统计学差异（P=0.008、P=0.000）,AG 组的 400μmol/LSA 组、600μmol/LSA 组血浆 IL-1β 水平小于 0μmol/L SA 组（P=0.008、P=0.002）,600μmol/L SA 组血浆 IL-1β水平小于 200μmol/L SA 组（P=0.041）;IG 组的 200μmol/L SA 组、400μmol/L SA 组、600μmol/L SA 组血浆IL-1β 水平小于 0μmol/L SA 组（P=0.000、P=0.000、P=0.000）。HC组的4个不同浓度SA组间血浆IL-1β水平无统计学差异（P＞0.05）。在AG、HC组,不同浓度SA和MSU共刺激对血浆IL-1β水平未见统计学交互作用（P＞0.05）,在IG组,不同浓度SA和MSU共刺激对血浆IL-1β水平存在相互拮抗作用（P=0.001）。分析SA与MSU相互拮抗作用:①有无SA刺激下,观察MSU刺激后血浆 IL-1β 水平:在0μmol/L SA 至 600μmol/L SA 刺激下,100μg/ml MSU、150μg/ml MSU刺激均能增加血浆IL-1β 水平（P＜0.05）,且 150μg/ml MSU刺激血浆IL-1β水平大于50μg/ml MSU刺激（P＜0.05）,仅在0μmol/L SA刺激下,50μg/ml MSU 能增加血浆 IL-1β 水平（P=0.022）,150μg/ml MSU刺激血浆IL-1β水平大于100μg/ml MSU刺激（P=0.000）。②有无MSU刺激下,观察SA刺激后血浆IL-1β水平:在Oμg/ml MSU刺激下,200μmol/L SA、400μmol、L SA、600μmol/L SA 刺激对血浆 IL-1β 水平无统计学作用（P＞0.05）。在50μg/ml MSU至150μg/ml MSU刺激下,200μmol/LSA、400μmol/LSA、600μmol/LSA 刺激均减少血浆 IL-1β水平,但只有在150μg/ml MSU刺激下,SA减少血浆IL-1β水平才有统计学差异（P=0.048、P=0.030、P=0.028）。4.在MSU和SA刺激实验中,AG、IG、HC组外周静脉血分别经0μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、150μg/ml 4 个浓度 MSU 刺激,在 IG 组 4个不同浓度MSU组间血浆总SOD活性、SOD1活性、SOD2活性均有统计学差异（P=0.011、P=0.034、P=0.030）,100μg/ml MSU 组血浆总SOD 活性、SOD1 活性大于 0μg/ml MSU 组（P=0.012、P=0.016）,100μg/ml MSU 组浆 SOD1 活性大于 50μg/ml MSU 组（P=0.041）,150μg/ml MSU组血浆总SOD活性、SOD1活性、SOD2活性大于0μg/ml MSU组（P=0.002、P=0.035、P=0.003）。在 AG、HC 组,4 个不同浓度 MSU组间血浆总SOD活性、SOD 1活性、SOD2活性均无统计学差异（P＞0.05）。AG、IG、HC 组外周静脉血分别经 Oμmol/L、200μmol/L、400μmol/L、600μmol/L4个浓度SA刺激,在AG、IG、HC组的,4个不同浓度SA组间血浆总SOD活性、SOD2活性均无统计学差异（P＞0.05）。在IG组,4个不同浓度SA组间血浆SOD1活性有统计学差异（P=0.000）,200μmol/L SA 组、400μmol/L SA 组、600μmol/L SA 组血浆 SOD1 活性大于0μmol/L SA 组（P=0.024、P=0.000、P=0.000）,600μmol/L SA 组血浆 SOD1 活性大于 200μmol/L SA 组（P=0.025）。在 AG、HC 组,4个不同浓度SA组间血浆SOD1活性无统计学差异（P＞0.05）。在AG、IG、HC组,不同浓度SA和MSU共刺激对血浆总SOD活性、SOD1活性、SOD2活性均未见统计学交互作用（P＞0.05）。AG、IG、HC组外周静脉血经PBS刺激后IL-1βmRNA转录水平、血浆IL-1β水平、血浆总SOD活性、SOD1活性和SOD2活性与空白对照组比较均未见统计学差异（P＞0.05）。结论:1.1.00%乙醇刺激会加重痛风炎症反应,减少酒精含量摄入是痛风患者非药物治疗的重要部分。2.50-150μg/ml MSU晶体刺激会加重痛风炎症反应和氧化应激反应,氧化应激反应的加重间接表现为抗氧化酶SOD活性升高。3.200-600μmol/L SA和50-150μg/ml MSU晶体共刺激间歇期痛风患者外周静脉血有相互拮抗作用,SA可以减少MSU晶体刺激产生的血浆IL-1β蛋白,且呈浓度依赖性,SA刺激可以升高血浆SOD1活性。提示SA可能通过减少血浆IL-1β蛋白水平和升高血浆SOD1活性减轻痛风炎症反应和增强抗氧化能力。