目的构建人丙酮酸激酶基因PKM2(M2-type pyruvate kinse)的原核表达质粒pET30a(+)-PKM2,在大肠杆菌DH5α中进行基因扩增,导入大肠杆菌BL21中进行人丙酮酸激酶基因PKM2融合蛋白表达,镍离子柱亲和层析法纯化融合蛋白。方法用人HeIa细胞提取RNA,反转录获得人cDNA.以cDNA为模板,用PCR方法扩增出目的基因PKM2,用限制性内切酶(BarnH I.Sal I及Nde I.Sal I)对目的片段及质粒pET30a(+)进行双酶切,及T4DNA连接酶进行连接,并将它们依次插入到表达载体pET30a(+)的多克隆位点中构建重组质粒pET30a(+)-PKM2。经限制性内切酶(BamH I.Sal I及Nde I.Sal I)进行双酶切和DNA测序证实正确后,将此质粒转化入大肠杆菌BL-21(DE3)中表达融合蛋白PKM2,用Ni-NTA亲和层析柱进行纯化,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),考马斯亮兰染色,在凝胶成像分析系统中分析纯化后蛋白情况。结果通过PCR方法,成功获得目的基因片段。经BamH I.Sal I及Nde I Sal I双酶切鉴定所切下的片段大小与理论值相符,北京六合华大基因科技服务有限公司测序结果和报道一致。经SDS-AGE分析,导入质粒载体pET30a(+)-PKM2后,大肠杆菌BL21成功大量表达PKM2融合蛋白；Ni-NTA亲和层析柱纯化后的蛋白约在58KDa位,条带单一,无杂带出现。结论成功构建了人PKM2基因的扩增质粒载体pET30a(+)-KM2；成功表达纯化了PKM2融合蛋白,为肿瘤疫苗研制和肿瘤标记物快速诊断的研究奠定基础。