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目的本实验采用“恐伤孕鼠”的方法复制肾精亏虚的模型,研究Reelin蛋白对先天肾虚仔鼠脑发育的影响机制。方法①本实验采用3月龄SD(Sprague-Dawley)大鼠雌性40只,雄性20只,将其按2:1的比例合笼配对。受孕后的雌鼠用随机取数法分为正常组、模型组和补肾组,每组各10只。自怀孕第一天起,模型组和补肾组每日以恐吓为主的复合应激刺激孕鼠。补肾组自造模第一天起,每日予中药左归丸浓缩剂2ml/100g体重灌胃,正常组及模型组亦根据雌鼠体重予以生理盐水灌胃,造模时间为整个妊娠至分娩期间。雌鼠分娩后,分别计算各组雌鼠每胎生产数(仔鼠总数/妊娠并分娩的雌鼠只数)以评估雌鼠的生育力。分别称量各组雌鼠所产仔鼠体重以及测量初生仔鼠身长。②仔鼠出生当天每窝随机取1--2只仔鼠断头取全脑,称取全脑湿重,计算各组仔鼠全脑湿重的平均值及脑重指数(脑重指数=全脑湿重mg/鼠体重g),然后将全脑固定,切取包含皮质的脑片,行光镜和电镜观察。③雌鼠分娩后,在仔鼠出生当天断头取血,用化学发光法检测血清FT3、FT4、TSH的含量。④用免疫组化法检测恐伤孕鼠对其仔鼠大脑Reelin、VLDLR及P-DAB1表达影响。⑤用RT-PCR法检测恐伤孕鼠对仔鼠大脑皮质Reelin、VLDLR及ApoER2的mRNA表达影响。结果①模型组孕鼠每胎生产数比正常组和补肾组明显低(P<0.01)。模型组仔鼠出生当天体重及身长与正常组和补肾组比较,有显著性差异(P<0.05)。②模型组仔鼠全脑湿重低于正常组和补肾组,模型组与正常组比较有显著性差异(P<0.05),正常组与补肾组仔鼠全脑湿重相比无明显改变;仔鼠大脑组织包括皮质区的形态学改变:模型组仔鼠大脑皮质区光镜下可见细胞较松散,组织结构较模糊,存在散在片状水肿,水肿区域神经细胞数目减少。电镜下模型组仔鼠大脑皮质区可见到多数神经细胞出现细胞器结构异常,部分伴有细胞核固缩。正常组与补肾组仔鼠形态学相比无明显改变。③正常组、模型组和补肾组三组血清FT3、TSH的含量比较,其结果无显著性差异;模型组与正常组和补肾组比较,血清FT4的含量显著降低(P<0.05)。④正常组仔鼠大脑皮质细胞中Reelin、VLDLR及P-DAB1蛋白表达最强;补肾组仔鼠大脑皮质细胞Reelin、VLDLR及P-DAB1蛋白表达有所减弱;模型组仔鼠大脑皮质细胞中Reelin、VLDLR及P-DAB1蛋白表达最弱;与正常对照组比较,补肾组和模型组仔鼠大脑皮质Reelin、VLDLR及P-DAB1平均灰度值明显降低(P<0.01);与模型组比较,补肾组仔鼠大脑皮质Reelin、VLDLR及P-DAB1的平均灰度值明显升高(P<0.01)。⑤补肾组和模型组仔鼠大脑皮质Reelin、VLDLR及ApoER2mRNA表达均低于正常组(P<0.01),模型组仔鼠大脑皮质Reelin、VLDLR及ApoER2mRNA表达低于补肾组(P<0.01)。结论本课题首次提出了“Reelin蛋白影响先天肾虚仔鼠大脑皮质发育”的观点,并从中医学角度深入阐述探讨肾对脑的结构和功能影响,以及Reelin蛋白与脑发育的关系。本实验运用运用恐吓为主的复合应激法刺激方法成功复制出肾精亏虚模型,通过一般情况观察,我们发现模型组仔鼠具有先天肾虚的表现;通过显微镜下观察我们发现模型组仔鼠大脑皮质发育存在明显的障碍,出现一系列诸如大脑皮质脑细胞的高尔基复合体肥大,细胞核核周水肿、固缩、染色质凝集、线粒体肿胀等病理改变。补肾组仔鼠大脑皮质在光学显微镜及电子显微镜下的变化与正常组仔鼠基本一致。表明中药左归丸方可有效阻断先天肾虚对脑皮质发育的影响。模型组仔鼠出现大脑皮质细胞中Reelin、VLDLR及P-DAB1蛋白表达下调,Reelin、VLDLR及ApoER2mRNA表达下调,血清TH含量显著下降。据此,我们推测Reelin信号通路和TH含量显著下降是先天肾虚仔鼠大脑发育障碍的重要环节。左归丸可以通过调节Reelin信号通路和TH含量而阻断仔鼠大脑皮质发育障碍。