壮骨止痛方醇提A部位对去势雌鼠骨质疏松症雌激素相关因子的调节作用

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目的:1.探讨骨质疏松症与雌激素及其相关因子的相关性。2.探讨壮骨止痛方醇提A部位(前期实验已证实其为壮骨止痛方的主要药效部位)对骨质疏松症的作用机制,主要观察中药对去势雌鼠激素水平、血清生化指标、骨密度和骨生物力学、骨形成和骨吸收相关细胞因子蛋白和基因表达的影响。方法:第一部分文献回顾采用计算机网络技术,以及文献检索与流行病学回顾性研究方法,对中医药防治骨质疏松症的病因病机、临床分型、治则治法以及当前研究进展进行研究分析。大量研究表明中药治疗骨质疏松症具有疗效肯定,且副作用小和无耐药性,是值得深入探索的领域。第二部分壮骨止痛方醇提A部位对去势雌鼠骨质巯松症的实验研究选取3月龄250g左右SD雌性大鼠75只,按体重随机分为空白对照组、假手术组、模型组、壮骨止痛方组、无水乙醇提取A部位组,共5组,每组15只。去卵巢术后5天拆线并开始给药,连续13周。取血和骨标本从骨密度、骨生物力学、病理形态学,应用免疫组化法(SABC法)和原位杂交法分别检测雌激素相关细胞因子蛋白与基因的表达研究其药效,应用放射免疫法和酶联免疫吸附法从血清E2、PTH、CT、BGP、ALP等方面研究其作用机理。结果:第一部分文献回顾骨质疏松症病位在骨,与肝肾关系最为密切。其病本为肾气虚衰,肝肾阴精不足,病标为瘀阻骨络。治疗当遵从《本草经疏》“益肝肾则筋骨自坚”的理论补肾壮骨,填精益髓,益肝强筋,活血止痛。根据中医学“肾主骨”理论,选壮骨止痛方为被试因素,临床疗效确切。第二部分壮骨止痛方醇提A部位对去势雌鼠骨质疏松症的实验研究1.壮骨止痛方醇提A部位对去势雌鼠血清生化指标的影响与模型组比,全方组和醇提A部位组能够明显升高血清E2、CT、BGP水平,差异有显著意义(p<0.05)。与模型组比,全方组和醇提A部位组能够明显降低血清PTH、ALP含量;差异有显著意义(p<0.05)。2.壮骨止痛方醇提A部位对去势雌鼠骨密度和骨生物力学的影响与模型组比较,全方组和醇提A部位组股骨密度和腰椎骨密度明显增加,差异有显著意义(p<0.05)。与模型组比较,全方组和醇提A部位组胫骨最大应力和胫骨最大抗弯强度明显增加,差异有显著意义(p<0.05)。3.壮骨止痛方醇提A部位对去势雌鼠骨组织病理形态及超微结构的影响骨组织常规病理学切片,普通光学显微镜下观察结果如下:与模型组比较,全方组和醇提A部位组骨小梁密度分布较均匀,梁髓比基本恢复正常,镜下可见成骨细胞。骨组织透射电镜超微结构观察结果如下:与模型组比较,全方组和醇提A部位组骨细胞线粒体基本正常,骨细胞突起无明显改变,骨陷窝明显缩小呈扁椭圆形。4.壮骨止痛方醇提A部位对去势雌鼠雌激素相关因子蛋白的影响免疫组化法(SABC法)检测MMP-2、OPG表达模型组与空白对照组比较,水平明显降低,差异有统计意义(p<0.05);全方组和醇提A部位组MMP-2、OPG蛋白水平明显高与模型组,差异有显著意义(p<0.05)。MMP-9、IL-6表达模型组与空白对照组比较蛋白水平明显升高,差异有显著意义(p<0.05);全方组和醇提A部位组与模型组比较,水平明显降低,差异有显著意义(p<0.05)。5.壮骨止痛方醇提A部位对去势雌鼠雌激素相关因子基因的影响原位杂交法检测模型组TGF-β1mRNA、I型胶原mRNA表达明显降低,与空白对照组比较有显著差异(p<0.05);全方组和醇提A部位组与模型组比较,表达水平明显升高,差异有统计意义(p<0.05)。结论:1.中医学认为病本为肾气虚衰,肝肾阴精不足,病标为瘀阻骨络,根据肾主骨理论,研究壮骨止痛方防治骨质疏松症,调节去势雌鼠雌激素相关因子平衡,促进骨形成和抑制骨吸收,使骨重建得以进行。2.去势雌鼠血清E2、CT、BGP、ALP降低,血清PTH升高,股骨和腰椎骨密度下降,胫骨最大应力和胫骨最大抗弯强度均下降,骨组织骨形成相关因子MMP-2、OPG表达减少,骨吸收相关因子MMP-9、IL-6表达增加,TGF-β1mRNA和I型胶原mRNA表达减少。从而促进骨吸收抑制骨形成,引起骨质疏松症。3.壮骨止痛方醇提A部位可以升高血清E2、CT、BGP、ALP,降低血清P-TH水平,使股骨和腰椎骨密度增加,胫骨最大应力和胫骨最大抗弯强度均增加,骨组织骨形成相关因子MMP-2、OPG表达增加,骨吸收相关因子MMP-9、IL-6表达减少,TGF-β1mRNA和I型胶原mRNA表达增加。降低了骨转换,促进骨形成,抑制骨吸收,改善骨基质的分子结构,加强骨生物力学性能从而治疗骨质疏松症。
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