机械牵张刺激下大鼠皮肤再生的关键基因筛选

来源 :上海交通大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:woaiwojiaren5210
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目的明确机械牵张刺激下大鼠皮肤再生相关基因表达谱的变化,并筛选出其中的关键基因。方法建立大鼠皮肤扩张模型,以未扩张皮肤为对照,以注水量不同分组取材。分别是:对照组(ctrl)、扩张器最终注水60 ml组(exp60)、扩张器最终注水120 ml组(exp120)、扩张器最终注水180 ml组(exp180)。取材后一部分样本切片做免疫荧光染色,荧光标记增殖标记物Ki67,绘制皮肤细胞增殖曲线。另一部分样本做基因芯片,检测mRNA表达谱的变化并利用t检验和差异表达的倍数变化(FC值)筛选出关键基因。筛选出皮肤再生的关键基因后,用PCR方法验证以确认该基因的表达量及其与皮肤增殖之间的关系。结果免疫荧光染色显示,增殖标记物Ki67在各组的表达量由低到高依次是:ctrl、exp180、exp60、exp120。本研究筛选出不同机械牵张刺激下大鼠皮肤再生的11个差异基因,分别为:Myh1、Myh2、Myh3、Myh4、Car6、Pi15、Apt12a、Mt1a、Cthrc1、Rsad2、IGF-BP5。其中IGF-BP5(重组人胰岛素样生长因子结合蛋白-5)和对照组的皮肤内表达相比为下调基因,PCR验证得出,IGF-BP5在各组的表达量由低到高依次是:exp120、exp60、exp180、ctrl。结论机械牵张刺激下,随着扩张时间及量的增加,大鼠皮肤再生呈现早期细胞增殖加速,中期增殖活跃,后期增殖减缓的趋势;且IGF-BP5可能为影响机械牵张刺激下大鼠皮肤再生的关键基因。
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