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口蹄疫（Foot-and-Mouth Disease,FMD）是由口蹄疫病毒（Foot-and-Mouth Disease Virus,FMDV）引起的一种急性、烈性、高度接触性传染病,能造成严重的经济损失和社会影响。尽管目前传统疫苗在FMD防控中发挥着重要作用,但也存在缺点,如由于病毒灭活不彻底造成活病毒逃逸等。因此,研制安全、有效的新型疫苗是今后防控FMD的必然趋势。病毒样颗粒（Virus-Like Particles,VLPs）,由于具有与天然病毒粒子相似的结构,及较高的免疫原性和安全性,已被广泛地应用到疫苗的开发和应用中。近年来,FMDV VLPs相关研究显示,相比于其它血清型FMDV,O型FMDV衣壳蛋白耐酸性较低,导致其在低pH值的昆虫细胞中组装效率差甚至不组装。因此,本研究以A型FMDV AF/72株的衣壳蛋白基因P12A为骨架,将O型FMDV O/BY/CHA/2010株的结构蛋白基因VP1嵌合入AF/72株的衣壳蛋白基因P12A中,形成O-A嵌合型FMDV衣壳蛋白基因P12A（O-VP1）。通过限制性酶切位点将密码子优化合成后的嵌合衣壳蛋白基因P12A（O-VP1）和AF/72株蛋白酶基因3C,插入到带双启动子的表达载体pFastBac?Dual中,构建质粒pFBDual-P12A3C（O-VP1）,转化后筛选获得重组杆粒rBacmid-P12A3C（O-VP1）,鉴定之后转染Sf9细胞,获得重组杆状病毒rBac-P12A3C（O-VP1）。间接免疫荧光（IFA）和Western-blot检测结果显示,嵌合P12A（O-VP1）基因能够在Sf9正确表达并具有良好反应原性。电镜观察结果表明,嵌合P12A（O-VP1）能够被3C蛋白裂解并自组装形成与天然病毒粒子大小相似的VLPs。为了进一步评估嵌合VLPs的免疫原性,将表达的嵌合VLPs与ISA-206佐剂混合乳化制备成疫苗后免疫豚鼠。结果表明嵌合VLPs疫苗能够诱导豚鼠产生较高水平的抗O型FMDV体液和细胞免疫应答,加强免疫后用100 GPID50剂量的O型口蹄疫病毒攻击,嵌合VLPs免疫豚鼠的保护比例为4/5,而阴性对照则5/5全数发病。本研究为今后FMDV VLPs疫苗的设计和研制提供了新的思路和依据。近年来,通过将疫苗抗原特异性的靶向树突状细胞（dendritic cell,DC）来改善疫苗的免疫原性已成为一种新的疫苗设计策略。DC-SIGN（DC-specific ICAM-grabbing non-integrin）,又被称为CD209,是DC膜表面的一种C型凝集素受体,利用化学交联或基因工程方法将抗原与DC-SIGN配体结合可以使抗原特异性的靶向DC,进而显著提高疫苗的免疫效果。因此,本研究将DC-SIGN特异性配体HIV膜糖蛋白gp120和HCV包膜糖蛋白E2,分别与口蹄疫病毒AF/72株的主要抗原蛋白VP1进行重组融合,在昆虫细胞中表达2种DC靶向性重组融合蛋白VP1-gp120和VP1-E2,通过豚鼠免疫试验比较了它们及单独表达的VP1蛋白在豚鼠模型中的免疫原性。结果表明VP1-gp120和VP1-E2都能诱导豚鼠产生抗口蹄疫病毒特异性IgG抗体,刺激淋巴细胞特异性增殖及诱导产生较高水平的IFN-γ,且VP1-gp120和VP1-E2诱导抗口蹄疫病毒特异性IgG抗体的能力显著地强于VP1蛋白（p<0.01）。因此,靶向DC的融合设计表达能够在一定程度上提高抗原的免疫原性,为今后亚单位疫苗的研究提供了新的思路。