目的：食管癌是危害人类生命健康的主要疾病之一，是我国常见的恶性肿瘤。其发病以华北地区为高，据1980年统计，其死亡率为9.7/10万，占恶性肿瘤死亡率的第四位(9)。多年来，世界各国医务工作者对食管癌的诊治进行了不懈地研究和探索，但因其早期临床症状不明显，待就诊时，常已发展至中、晚期，造成手术及放疗、化疗后效果不理想。随着分子生物学技术的发展和完善，对肿瘤的研究已进入基因水平。学者发现，在参与肿瘤发生、发展的有关基因中，除癌基因和抑癌基因外，还存在另一种癌相关基因，即错配修复基因(Mismatch Repair Gene, MMR)。MMR突变子表型最常见的是微卫星DNA序列不稳定性(Microsatellite Instability, MSI)。微卫星和MSI是近年有关肿瘤研究中的一个热点，它是继癌基因和抑癌基因之后，肿瘤发病分子机制的又一重大进展。微卫星DNA是指一类不编码的、数量可变的、广泛存在于原核和真核基因组中的核苷酸重复序列，以二核苷酸重复序列为常见。它多位于基因的非编码区以及染色体的近端粒区，遵循孟德尔遗传规律。MSI是指由于DNA复制错误(Replication errors)引起的简单重复序列的改变，表现为肿瘤组织与其相应的非肿瘤组织DNA结构性等位基因的大小发生改变。MSI最早在1993年发现<WP=4>于遗传性非息肉性结肠癌(Hereditary Nonpolyposis Colorectal Cancer, HNPCC)，后又陆续在胃癌、胰腺癌、子宫内膜癌、卵巢癌、小细胞肺癌等肿瘤中发现。迄今为止，几乎每一类型的肿瘤都已被证明有MSI的存在。产生MSI的主要原因是MMR功能缺陷，不能正常发挥错配修复作用，引起复制差错，导致基因组不稳定，进而引起癌变。有关MSI在食管癌中的表现，因国内外的研究刚刚开始，结果不尽一致。本实验试图对食管癌和MSI的相关性做进一步研究，力求找到一种筛查食管癌高发区易感个体新的分子方法，对高风险个体进行早期诊断，以利于设计有针对性的治疗方案。材料与方法：所采用标本均为2001年8月至2003年1月在河北医科大学第四医院胸外科行食管癌手术切除的病例。本组共30例食管癌患者，男17例，女13例。年龄42～72岁，平均年龄57.2岁。病理类型：鳞状细胞癌23例，腺癌2例，小细胞癌5例；其中高分化～中分化癌20例，低分化癌5例，未分化癌5例；PTNM分期：Ⅰ期1例，Ⅱ期16例，Ⅲ期13例；病理证实有区域淋巴结转移者14例，未证实有区域淋巴结转移者16例。所有病人均无肿瘤家族史，亦未接受过放疗及化疗。所有病例均记录居住地、生活习惯等一般情况。每一病例割取肿瘤中心部位的癌组织及同一标本远离癌组织5cm以上的食管正常粘膜，用蛋白酶K消化、酚氯仿异戊醇提取正常组织和癌组织基因组DNA。选取位于3p21.1～3p14.3的D3S1067和位于18q22.3～18q23<WP=5>的D18S58两个微卫星位点，按下列条件进行PCR扩增：D3S1067：(1)预变性94℃，3min；(2)变性: 94℃，30s；退火: 59℃，30s；延伸: 72℃，30s。40个循环；(3)72℃延伸5 min。D18S58：(1)预变性94℃，5min；(2)变性: 94℃，45s；退火: 59℃，30s；延伸: 72℃，45s。35个循环；(3) 72℃延伸10min。PCR产物经7%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后，EB染色，在凝胶呈像系统上观察摄影。将肿瘤组织与相应的正常组织比较，若肿瘤的某一等位基因出现条带的增多或位置的改变，则评价为微卫星不稳定(MSI)；若等位基因为纯合子，记为无信息(UI)。结果：1. 不同位点MSI差异较显著(见Table 2)。30例食管癌组织中，D3S1067和D18S58两个位点均正常的有18例，8例在D3S1067位点出现MSI，为26.7%，频率较高；6例在D18S58位点出现MSI，为20%；2例在两个位点同时有MSI的表达(见Table 2)。2. 食管癌中3号染色体，尤其是3p14～3p21位点的重排频率较高。3. 23例鳞状细胞癌中，MSI阳性者有6例，为26.1%；2例腺癌的MSI阳性有1例；5例小细胞癌均为MSI阳性，即100%。可见，食管小细胞癌MSI阳性率明显高于食管鳞状细胞癌，其差异在统计学上有非常显著意义(P<0.01) (见Table 3, Figure 1,2)。4.病理分级中，20例高～中分化食管癌标本，其MSI阳性者有6例，阳性率为30%； 10例低～未分化标本中6例检测到MSI，阳性率是60%。PTNM分期Ⅰ～Ⅱ期标本中MSI阳性率为41.2%，Ⅲ期的阳性率为38.5%，其差异在统计学上无显<WP=6>著意义(p>0.05) (见Table 3)。食管癌标本中有区域淋巴结转移的MSI阳性率为35.7%，无区域淋巴结转移的阳性率为43.7%，差异无统计学意义(P>0.05) (见Table 3)。癌组织侵及粘膜、粘膜下层和肌层标本MSI阳性率为36.4%，侵及全层和食管外组织标本的阳性率是42.1%，差异无统计学意义(P>0.05) (见Table 3)。结论：1. MSI与食管癌的临床病理类型有关，尤其是与食管小细胞癌的发生关系密切。2. 研究未发现MSI与食管癌的临床分期、细胞分化程度、癌组织浸润深度和有无区域淋巴结转移等参数相关。3. 在3p、18q位点均检测到较高频率的MSI，说明食管癌在多个染色体位点均存在微卫星不稳定现象。4. 3p21位点检测到较高频率的MSI现象，说明3p是食管癌相关的热点区域，3p位点基因的改变在食管癌发生过程中具有较重要意义。5. 本实验只发现MSI与食管癌的临床病理类型有关?