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目的 胰腺癌恶性程度高，5年生存率不足5％。预后差归因于其早期易发生胰周侵袭和远处转移。故研究影响胰腺癌侵袭和转移的分子标记物对揭示胰腺癌恶性生物学行为至关重要。本研究旨在探讨Numb是否通过调控肿瘤相关基因MDM2和p53，以及介导上皮细胞间质转化(EMT)的发生这两个机制影响胰腺癌的侵袭和转移。 方法 组织水平:免疫组化、免疫印迹及实时定量PCR检测Numb、MDM2、p53以及EMT标记蛋白E-cadherin和vimentin在胰腺癌中表达相关性及临床病理学意义。细胞水平:转染及化疗药物干预实验检测Numb、MDM和p53三者表达相互作用，以及协调表达对胰腺癌细胞生物学行为的影响及机制。同时构建Numb沉默或过表达胰腺癌稳转细胞系，检测Numb过表达或沉默对转化生长因子TGFβ1和表皮生长因子EGF诱导胰腺癌EMT发生的影响。动物水平:检测Numb沉默和过表达稳转细胞系分别对裸鼠皮下成瘤及肿瘤血行转移的影响。 结果 1、Numb、MDM和p53协调表达对胰腺癌侵袭和迁移的调控作用:①组织水平，Numb表达与肿瘤大小、分化程度及临床UICC分期呈负相关。而MDM2和p53分别与肿瘤T及UICC分期呈正相关。相关性分析:Numb表达与MDM2呈负相关，两者均与突变型p53无关。同时，Numb可以作为影响胰腺癌患者预后的独立保护因素，Numb阳性表达结合MDM2阴性表达的胰腺癌患者预后更好。②细胞分子水平，Numb过表达或沉默能够正性调控野生型但非突变型p53的表达。同时Numb沉默增加野生型Capan-2细胞对化疗药物的敏感性，并伴随着p53和Caspase-3表达的显著下调。免疫沉淀显示:Numb与p53可形成共沉淀，并且Numb沉默促进了p53的泛素化降解。③Numb过表达抑制了PANC-1细胞侵袭和迁移，这种抑制作用在共转染MDM2siRNA后更加明显;相反，Numb沉默促进了Capan-2细胞侵袭和迁移，这种促进作用在共转染p53siRNA后更加显著。泛素化降解机制正是介导Numb-MDM2-p53共同对胰腺癌细胞的侵袭和迁移调控的关键机制。 2、Numb通过介导TGFβ1和EGF诱导胰腺癌EMT的发生调控胰腺癌的侵袭和转移:①组织水平，E-cadherin正常表达与肿瘤分化程度及术后肝转移呈负相关;vimentin表达与肿瘤分化程度和淋巴结转移呈正相关。相关性分析，Numb与E-cadherin表达呈正相关，与vimentin表达无关。同时Numb阳性结合E-cadherin正常表达的患者预后更好。②细胞水平，成功构建Numb过表达的PANC-1和Numb沉默的BxPC-3胰腺癌稳转细胞系。Numb过表达能够抑制TGFβ1诱导PANC-1细胞EMT的发生，表现为抑制TGFβ1诱导下EMT样细胞形态改变及细胞侵袭力的增强，以及抑制TGFβ1诱导下E-cad表达的下调和vimentin表达的上调;Numb沉默能够促进EGF诱导BxPC-1细胞EMT发生，表现为促进EGF诱导下EMT样细胞形态改变及细胞侵袭力的增强，以及促进EGF诱导下E-cad表达的下调和vimentin表达的上调。③动物水平:Numb沉默的BxPC-稳转细胞明显促进裸鼠皮下成瘤;相反，Numb过表达的PANC-1稳转细胞抑制了裸鼠体内肿瘤血行转移。 结论 我们首次揭示了Numb-MDM2-p53存在的泛素化调控关系介导了三者共同对胰腺癌侵袭和迁移的调控作用;同时，Numb还通过介导TGFβ1和EGF诱导的EMT发生抑制胰腺癌的侵袭和转移。