第一部分高效毛细管电泳法测定游泳池中尿液指示物乙酰磺胺酸钾目的:建立测定游泳池水中新型尿液指示物乙酰磺胺酸钾含量的高效毛细管电泳新方法,并成功应用于泳池水中乙酰磺胺酸钾的定量分析。方法:采用内壁无涂层熔融石英毛细管(60.2 cm×75μm,有效长度50 cm),缓冲液为10 mmol/L的硼砂溶液(p H=9.30),分离电压为24 k V,进样时间为20 s,检测波长为226 nm。取30 m L游泳池水样过滤,经固相萃取净化富集后进样分析。结果:在优化条件下,乙酰磺胺酸钾在0.2～100.0μg/m L浓度范围内呈现良好的线性关系(r=0.9998),检出限为50.0 ng/m L,相对标准偏差(RSD)为1.8%,加标回收率在96.0%～103.6%之间。结论:该方法准确可靠,适用于游泳池水样中乙酰磺胺酸钾的检测。第二部分胶束电动毛细管色谱法测定血浆中帕金森病的早期诊断标志物–咖啡因及其主要代谢物目的:建立测定血浆中咖啡因及其主要代谢物–副黄嘌呤、可可碱和茶碱的胶束电动毛细管色谱法,用于临床辅助早期诊断帕金森病。方法:采用内壁无涂层熔融石英毛细管(60 cm×75μm,有效长度50 cm),缓冲液为35 mmol/L的磷酸盐溶液–25 mmol/L十二烷基硫酸钠溶液(p H=10.5),分离电压为15 k V,进样时间为15 s,检测波长为210 nm。1 m L血浆样品经固相萃取净化浓缩后进样电泳分析。结果:在优化条件下,咖啡因在0.5～100.0μg/m L浓度范围,及其三种主要代谢物分别在0.4～100.0μg/m L、0.4～100.0μg/m L和0.3～100.0μg/m L浓度范围内呈现良好的线性(r>0.9996),检出限在4.0～7.5 ng/m L,加标回收率在88.0%～105.9%之间,RSD<8.0%(n=5)。结论:该方法准确可靠,适用于血浆中咖啡因及其三种主要代谢物的检测,对帕金森病早期诊断提供了有效辅助支持。第三部分实时荧光RT-RPA法快速检测食品,水和生物样本中诺如病毒目的:建立快速检测诺如病毒的等温实时荧光反转录重组酶聚合酶(RT-RPA)新方法。方法:基于GⅡ型诺如病毒的高度保守区域ORF1–ORF2连接处基因,设计了GⅡ型诺如病毒通用特异性引物和Exo探针,采用便携式等温扩增仪GenieⅢ实时监测核酸扩增结果,39℃20 min可完成样本核酸检测。结果:RT-RPA方法能够特异性扩增GⅡ型诺如病毒,而对GⅠ型诺如病毒、甲肝病毒、手足口病毒、腺病毒等均无扩增。以体外转录的No Vs GⅡ型RNA作为模板,检测限可达1.66×10~2拷贝/μL。实际样本分析显示,灵敏性为96%,特异性为100%。结论:该方法简便快速,实际适用性强,为环境和临床样本诺如病毒的监测及疾病防控提供了有力支持。第四部分多重微滴数字PCR法分离检测食品,水和生物样本中GⅠ,GⅡ型诺如病毒和甲肝病毒目的:建立分离及同时快速检测GⅠ,GⅡ型诺如病毒和甲肝病毒的多重微滴数字PCR法。方法:参考标准ISO 15216-2(2019),合成GⅠ,GⅡ型诺如病毒及甲肝病毒的特异性引物和探针,采用探针比例法,以构建的三种病毒的质粒标准品为模板,优化确定dd PCR反应中的探针浓度,PCR扩增程序退火温度,退火/延伸时间,并进行方法的线性范围、特异性、灵敏性及精密度等验证。结果:确定dd PCR反应中的最佳引物探针浓度为900 nmol/L和450nmol/L,退火温度为59℃,退火/延伸时间1 min。诺如病毒和甲肝病毒质粒浓度范围在4～500拷贝/μL(20～2500拷贝/20μL dd PCR反应液)时,dd PCR方法线性相关系数均大于0.99。方法的定量限为4拷贝/μL(20拷贝/20μL dd PCR反应液),检出限:诺如病毒GⅡ型和甲肝病毒为5拷贝/20μL dd PCR反应液,诺如病毒GⅠ型为7.5拷贝/20μL dd PCR反应液。结论:建立的dd PCR方法特异性良好,对其他病毒无扩增,可用于实际样品GⅠ,GⅡ型诺如病毒和甲肝病毒的同时快速定量检测。