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目的:淋巴结转移是前列腺癌患者预后不良和死亡的主要因素。在对早期前列腺癌患者施行根治性手术时同时需要清扫出足够多的淋巴结,术后才能进行准确的分期,从而早期而正确的进行术后辅助治疗。近红外荧光显影技术作为一种新型的术中导航手段日益引起人们的关注,且以前列腺特异性膜抗原（PSMA）为靶点的特异性影像学和手术成为研究热点。本研究首先在术中利用吲哚菁绿（ICG）来进行前列腺及盆腔淋巴结显影,观察荧光辅助手术对于前列腺与淋巴组织识别的有效性和可行性,并对其识别癌性淋巴结的作用进行评价。其次研制出新型能与PSMA特异性结合的前列腺癌特异性荧光探针PSMA-12-IRDye800CW,通过细胞实验和动物模型试验评价其临床前的有效性和安全性。方法:1.入组前列腺癌患者60名,分为实验组接受荧光显影辅助机器人前列腺根治术及淋巴清扫,术前利用经会阴前列腺穿刺注射的方法将ICG注入前列腺体内;对照组为常规机器人辅助前列腺根治术及淋巴结清扫。实验组通过近红外摄像头进行荧光导航前列腺切除以及淋巴组织切除与传统手术方式对比淋巴结清扫数目,以及对癌性淋巴结识别的特异性。同时对比两种手术的安全性和疗效。2.对目前临床核医学应用的PMSA-617配体进行优化改造研制成PSMA-12-IRDye800CW特异性荧光探针,在细胞层面通过荧光显微镜观察PSMA表达阳性（PSMA+）和PSMA表达阴性（PSMA-）细胞系中的有效性和特异性,通过荧光分光光度计检测其与PSMA抗原的亲和力,通过细胞计数试验评价其细胞毒性;建立前列腺癌移植瘤模型,通过尾静脉注射PSMA-12-IRDye800CW,观察其在PSMA+和PSMA-细胞小鼠移植瘤模型中的有效性和特异性。通过应用高剂量该探针进行检测小鼠的肝肾功能、体重等来评价该特异性探针的体内毒性。结果:1.第一部分研究中30例研究组患者接受了经会阴前列腺穿刺注药后30例患者前列腺腺体显影良好且与周围非荧光显影组织区别明显。实验组患者没有发生与ICG相关的任何不良反应,证实了其安全性。30例研究组患者在术中均观察到了盆腔淋巴组织荧光显影,荧光显影的特征为细管状及团块状,根据荧光范围切除下的淋巴组织经术后病理证实分别为淋巴管及淋巴结组织。所有患者切除下的淋巴结总数为927枚,研究组495枚,对照组429枚,其中研究组出现显影淋巴结419枚,显影率高达74.4%。所有患者中共发现癌性淋巴结40枚,对照组中发现癌性淋巴结15枚（0.9%）,实验组中发现癌性淋巴结25枚（1.3%）,其中实验组中癌性淋巴结在术中全部出现荧光显影,说明淋巴结荧光显影能够很好的识别淋巴组织,由于荧光显影不能区分良恶性说明其对于癌性淋巴结特异性差。手术效果方面,两组术后控尿率96.7%,两组无差别;研究组淋巴漏发生率6.7%（16.7%）,生化复发率3.3%（13.3%）低于对照组,但其差异无统计学意义。2.研究成功的合成了PSMA-12-IRDye800CW小分子配体特异性荧光团,并对其纯度和物理性质进行了表征,该化合物稳定性高。荧光显微镜结果发现该探针对于PMSA+LNCap细胞能特异性结合并且荧光良好且呈现浓度依赖性,对于PSMA-PC-3细胞无特异性。荧光分光光度计结果进一步表明该探针对于PSMA+细胞具有较高的亲和力（Km=13n M）但并不与PSMA-细胞结合。动物体内实验中,证实该探针在对PSMA+肿瘤的特异性好,荧光能够主动向肿瘤处浓聚且荧光强度高,在正常组织中非特异性荧光代谢快等优点,能够很好的进行肿瘤特异性显影。最后,小鼠毒性试验中发现高浓度的该探针未对小鼠的肝肾功能造成影响,并对小鼠的一般情况及体重改变无影响,是一种安全的化合物。结论:临床试验结论:（1）应用前列腺分区4针法进行经会阴穿刺分别注射ICG于前列腺两侧叶腺体进行术中前列腺及淋巴组织荧光显像安全、有效,能有效避免现有穿刺注药方法泄漏荧光污染手术视野的缺点。（2）ICG荧光介导的前列腺显影可作为前列腺与膀胱颈界限识别的辅助手段,尤其是经尿道前列腺切除术后意义更大。（3）本研究最重要的发现是:吲哚菁绿淋巴组织显影敏感性高,可作为淋巴结清扫过程中防止遗漏的辅助手段,且术中精准封闭淋巴管路,降低术后淋巴漏发生率。但是对前列腺癌组织特异性显影能力较差。特异性荧光探针的临床前研究我们证实了PSMA-12-IRDye800CW是一种与前列腺癌细胞亲和力高的荧光探针,它能够特异性的和前列腺癌细胞结合,向肿瘤组织转移并使其出现特异性荧光。且小分子配体探针易于合成,安全性高。是一种潜在的可以应用于临床前列腺手术中的药物,有进一步向临床转化的价值。由于实验中小鼠前列腺癌性淋巴结转移模型较难建立,基于淋巴结转移癌灶组织成分大多为前列腺癌细胞,根据细胞学层面的实验该探针对PSMA+细胞有较好的特异性和有效性,因此推测该探针对前列腺癌性淋巴结转移灶具有比ICG等染料更高的特异性和显影能力,也是本研究下一步需要完善的研究内容。