目的: 人脑胶质瘤是中枢神经系统中最常见的原发性肿瘤,目前临床上虽采用多种治疗方法,但由于其浸润性生长及其本身内在放射抵抗性的特性,胶质瘤患者的预后仍不理想。试验研究显示:给予外源野生型p53,可以控制胶质瘤的生长;并且给予WTp53同时予以放疗可以增强放射治疗的疗效。伽玛刀与常规放疗又有着明显的差别,p53是否增强伽玛刀治疗的疗效,在前期对于胶质瘤细胞系的研究中,初步认为是有效的,但在体应用后效果如何尚不清楚。 本研究第一部分应用C6鼠脑胶质瘤模型,通过体内实验,从分子生物学水平进一步探讨伽玛刀联合p53基因治疗胶质瘤的机理和疗效。第二部分拟用siRNA干涉技术来降低DNA修复基因DNA-PK的调节亚基Ku70的表达,为后期的DNA-PK的RNA干涉治疗联合伽玛刀放射外科治疗作好准备。 方法: 第一部分 本实验在建立C6鼠胶质瘤模型的基础上,于6天后进行MRI检查,确定成瘤后随机分为4组,每组14只(包括对照组、立体定向伽玛刀治疗组、p53治疗组及联合治疗组)。Ad-p53经293包装细胞进行病毒复制后,提取腺病毒,测定病毒滴度,备用。在动物模型建立后的第6、8天进行腺病毒介导的p53基因治疗,并于2天后随机处死一只大鼠进行Western杂交鉴定。第10天行立体定向伽玛刀放射外科治疗,给予边缘剂量15Gy,治疗后48小时每组处死6只大鼠进行生物学特性检测,其余8只在伽玛刀治疗后1、2、4、8周进行MRI检查,并观察生存期及生存状态,生物学特性检测包括HE染色、PCNA,P21,Cyclin D1(免疫组化法),凋亡(TUNEL法)。 第二部分 利用半定量PCR的方法,验证了C6细胞系中表达Ku70;化学合成3个siRNA干涉序列,转染C6肿瘤细胞系,依次分为干涉序列1、干涉序列 2、干涉序列 3、阴性对照组、空转组、和空白对照组,于转染siRNA 48小时后,进行半定量PCR,用bandscan分析软件分析,利用SPSS软件进行数