药物流产后绒毛组织中P-糖蛋白EMMPRIN和MMPs与子宫异常出血的关系研究

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第一部分药物流产后绒毛组织中P-糖蛋白与子宫异常出血的关系目的:通过检测P-糖蛋白在药流成功组和出血组绒毛组织中的表达,以及检测在人早孕期滋养细胞内米非司酮的浓度,探讨P-糖蛋白与药物流产后子宫异常出血的关系及其可能机制。材料与方法:选择自愿要求行药物流产的早孕妇女,收集服米索前列醇当天排出的绒毛组织,根据随访结果分药流成功组(37例)和出血组(37例)。采用免疫组织化学法和蛋白免疫印迹(Western Blotting)检测两组绒毛组织中P-糖蛋白的表达水平。体外培养早孕期绒毛滋养细胞,分实验组(20μM CsA组和40μM CsA组)和对照组,以及每组加米非司酮(分0.5μM组、1.25μM组和2.5μM组)后,用高效液相法分析绒毛滋养细胞内米非司酮的浓度。结果:P-糖蛋白主要定位于合体滋养细胞膜上;药流出血组P-糖蛋白的表达水平高于药流成功组(P<0.05);不同米非司酮浓度(0.5μM、1.25μM和2.5μM)的各组(20μM CsA组、40μM CsA组和对照组)间均无显著性差异(P>0.05)。结论:药物流产后绒毛组织中P-糖蛋白的高表达可能与子宫异常出血有关;在滋养细胞,P-糖蛋白不是通过将米非司酮从细胞内泵出,降低细胞内的浓度起作用的,即米非司酮可能不是P-糖蛋白的作用底物。第二部分药物流产后绒毛组织中MMP-2、MMP-9和EMMPRIN与子宫异常出血的关系目的:通过检测绒毛组织中MMP-2和MMP-9活性和其蛋白以及EMMPRIN在药流成功组和出血组的表达,探讨EMMPRIN、MMP-2和MMP-9与药物流产后子宫异常出血的关系。材料与方法:选择自愿要求行药物流产的早孕妇女,收集服米索前列醇当天排出的绒毛组织,根据随访结果分药流成功组(37例)和出血组(37例)。采用明胶酶谱法检测绒毛组织中MMP-2和MMP-9的活性,采用免疫组织化学法检测两组绒毛组织中MMP-2和MMP-9的蛋白表达水平。采用免疫组织化学法和蛋白免疫印迹(Western Blotting)检测两组绒毛组织中EMMPRIN蛋白表达水平。结果:绒毛组织中MMP-9表达水平药流出血组高于药流成功组(P<0.001),而MMP-2的表达水平两组无显著性差异(P>0.05)。两组绒毛组织中均未检测到MMP-2和MMP-9的活性。EMMPRIN主要定位于合体滋养细胞和细胞滋养细胞胞浆和胞膜,蛋白表达水平药流出血组低于药流成功组(P<0.05)。结论:药物流产后绒毛组织中MMP-9高表达及EMMPRIN低表达可能与子宫异常出血有关;而MMP-2表达可能与子宫异常出血无关。第三部分人滋养细胞P-糖蛋白与EMMPRIN的相互作用目的:探讨P-糖蛋白和EMMPRIN之间的相互作用。材料与方法:选择自愿要求行人工流产术的早孕妇女,收集行人工流产时的绒毛组织进行组织块培养24小时和48小时,加P-糖蛋白抑制剂(分20μM CsA组和40μM CsA组),采用Western Blotting法检测EMMPRIN蛋白的表达水平;加EMMPRIN单克隆抗体(分2.5μg/ml MEM-M6/1组和5.0μg/ml MEM-M6/1组),采用Western Blotting法检测P-糖蛋白的表达水平。结果:加P-糖蛋白抑制剂24小时和48小时后,EMMPRIN的表达水平在20μMCsA组、40μM CsA组和对照组三者之间均无显著性差异(P>0.05)。加EMMPRIN单克隆抗体培养24小时后,P-糖蛋白蛋白水平在2.5μg/ml MEM-M6/1组、5.0μg/mlMEM-M6/1组均比对照组低,差异均有显著性(P<0.001)。培养48小时后,P-糖蛋白表达水平在2.5μg/ml MEM-M6/1组、5.0μg/ml MEM-M6/1组和对照组三者之间差异均无显著性(P>0.05)。结论:在人滋养细胞P-糖蛋白对EMMPRIN的表达可能没有调控作用,而EMMPRIN可能调控P-糖蛋白的表达。
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