骨骼肌的生长发育状况直接影响到动物的产肉量和肉质。作为成体中的肌源性干细胞,卫星细胞被广泛用于骨骼肌发育的体外研究。卫星细胞的增殖和分化是一个复杂的生物学过程,受到多种转录因子和细胞信号分子的调控。近些年的研究发现,micro RNA对卫星细胞的增殖和分化有调控作用。在本实验室对牛骨骼肌卫星细胞分化过程中micro RNA的高通量测序完成之后,发现mi R-103在卫星细胞分化的过程中表达量高且变化差异性显著,但其对卫星细胞的增殖和分化的调节机制还不明确。我们首先以牛骨骼肌卫星细胞为试验对象,将卫星细胞在体外进行诱导分化,采用实时定量PCR技术检测在卫星细胞分化的过程中内源性mi R-103的表达模式。然后又利用瞬时转染的方法,将外源性的mi R-103过表达载体或mi R-103抑制剂转染到卫星细胞中,在上调或下调mi R-103的表达量之后,通过EDU功能检测和免疫荧光实验观察卫星细胞的形态变化并统计分析。同时又利用实时定量PCR和Western blot进行定量分析,检测卫星细胞分化后期的标记基因Myo G的表达水平受到的影响。最后利用生物信息学软件预测了mi R-103可能作用于CCNE1基因的m RNA的3’UTR。通过双荧光素酶报告基因实验、实时定量PCR和Western blot进行定量分析来验证mi R-103对CCNE1的调控作用。取得的研究结果如下:1.在牛骨骼肌卫星细胞分化的过程中,mi R-103的表达量逐渐上调,且在分化的第6天达到最大值。2.将构建成功的mi R-103过表达载体或mi R-103抑制剂转染到牛骨骼肌卫星细胞中,可以观察到在mi R-103的表达量被上调后,EDU阳性细胞的数目明显低于对照组,下降了53.2%,Myo G阳性细胞的数目明显高于对照组,为对照组的~1.58倍(P<0.05)。而当mi R-103的表达量被下调后,EDU阳性细胞数为对照组的~5.3倍,Myo G阳性细胞数与对照组相比下降了48%(P<0.05)。在分析实时定量PCR和Western blot的结果中发现在提高mi R-103的表达量之后Myo G的表达量显著提高,与对照组相比差异性显著(P<0.05)。相反在mi R-103的活性受到抑制之后,Myo G的表达水平也随之下调了与对照组相比变化差异性显著(P<0.05)。这些结果表明,mi R-103能够促进卫星细胞的分化,抑制细胞的增殖。3.在双荧光素酶报告基因实验,证实了mi R-103可以通过特异性结合CCNE1的3’UTR,降低CCNE13’UTR双荧光素酶重组质粒的荧光素酶活性。在实时定量PCR和Western blot定量分析的结果中可以看出看出mi R-103能够在mRNA和蛋白水平显著下调CCNE的表达(P<0.05)。CCNE1在卫星细胞分化过程中的变化与mi R-103的变化相对应,而且CCNE1的下调可以促进卫星细胞的分化。因此可以得出CCNE1为mi R-103的靶基因。综上所述,在卫星细胞分化的过程中,mi R-103可通过直接作用于CCNE1的3’UTR来影响牛骨骼肌卫星细胞的增殖与分化。确定了mi R-103对卫星细胞的分化作用以及其调控机制,为产肉性状的分子改良提供了新的思路。