A型流感病毒属于正粘病毒科，由8股负链RNA构成，按照核蛋白和基质蛋白的不同进行分型。NS1蛋白是由第8节段RNA编码，该蛋白在抑制宿主蛋白合成，诱导宿主细胞凋亡及促进病毒的合成和增殖等方面均有重要功能。本研究以1918A型流感病毒NS1蛋白为研究对象，通过全基因合成方法获得NS1蛋白的全序列，将NS1蛋白连接到pET28原核表达载体上，通过条件优化后确定的最佳诱导参数为：IPTG终浓度0.1mM，温度28℃，诱导时间6h。采用镍螯合层析法纯化获得可溶性His-NS1重组蛋白后免疫小鼠制备多抗。经ELISA检测，多抗的效价为1:1.6105。构建了pCTAP-NS1真核表达载体，用脂质体2000瞬时转染HEK细胞，转染48h后Western Blot能够检测到NS1蛋白。用G418筛选稳定表达NS1蛋白的细胞株，筛选40天后运用RT-PCR检测到NS1mRNA的存在，Western Blot表明NS1蛋白已经大量表达，说明已经成功筛选到稳定表达NS1蛋白的HEK细胞株。应用TAP串联亲和纯化技术纯化TAP-NS1重组蛋白复合物，定量后上样100μg进行双向电泳，并通过质谱分析确定蛋白序列。在质谱分析的所有蛋白中，由于HSP70与NS1均在细胞凋亡中具有重要作用，因此两者有可能存在相互作用。同时表达并纯化了带有GST标签的NS1蛋白及其两个结构域： RBD和ED共三种蛋白，运用GST Pull Down技术在体外验证了HSP70蛋白与NS1存在相互作用，并发现HSP70与RBD和ED结构域都具有结合位点。将GFP-NS1质粒转染A549细胞后运用荧光显微镜观察HSP70与NS1的定位，发现两者在细胞浆中发生共聚焦，说明HSP70与NS1在体内也存在相互作用。因此，本研究初步确定了HSP70与NS1之间的相互作用，为进一步研究NS1蛋白对宿主细胞的调控机制奠定的基础。