论文部分内容阅读
目的:探讨脊髓损伤后不同的时间、空间范围内神经细胞自噬的表达及表没食子儿茶素没食子酸酯（Epigallocatechin-3-Gallate，EGCG）对其的影响机制。 方法:钳夹法建立大鼠脊髓损伤模型，实验动物分为假手术组(n=40)，脊髓损伤组(n=40)，EGCG组(n=40)（分为运动功能测定部分和制备切片部分），用斜板实验和BBB评分方法观察大鼠SCI后不同时间(1 d，3d，1 w，2 w，3 w，4 w(n=5))，运动功能变化及EGCG对其运动功能的影响;用连续切片、结晶紫染色(CV)、平面计数方法确定SCI中心，用免疫组织化学和免疫荧光方法观察SCI后不同时间(6 h，12 h，1 d，3d，7 d(n=5))、从损伤中心到头端不同距离(0.05～4.55 mm)，神经细胞自噬相关蛋白Beclin-1和LC-3表达的时间、空间分布规律及EGCG对其影响。 结果:脊髓损伤术后1 d-4w，经斜板试验证实，脊髓损伤组大鼠相对于假手术组斜板角度在各个时间点明显减小，运动功能明显降低（P＜0.05）;EGCG组相对于脊髓损伤组，斜板角度在各个时间点明显增加（P＜0.05），除外1d和3d，均有统计学意义。BBB评分结果显示，脊髓损伤术后1 d～4w，脊髓损伤组大鼠相对于假手术组获得了更低的评分，运动功能明显降低（P＜0.05）;EGCG组相对于SCI组，大鼠各个时间点运动功能明显改善(P＜0.05)除1d外均有统计学意义。CV染色结果显示，在SCI后6h～7d时间内，在损伤中心处无神经细胞存活，从损伤中心往头端方向观察发现，随着距离的增加，在0.05～4.55 mm空间范围内，SCI组存活神经元数增加;EGCG组与SCI组相比，在相同的时间点和空间距离处，存活的神经元数明显增加（P＜0.05）。免疫组织化学结果显示，自噬相关蛋白LC3在SCI后6h～7d时间内，假手术组不表达或微量表达，SCI组LC3蛋白表达的神经元细胞数与假手术组在相同时间、相同距离处比较明显增加(P＜0.05); EGCG组与SCI组相比较，LC3阳性表达神经元数明显增加（P＜0.05），SCI后6h出现LC3阳性表达神经元细胞，3d时阳性细胞表达达高峰，持续表达7 d;自噬相关蛋白Beclin-1免疫组化检测结果:Beclin-1在SCI后6h～7d时间内，假手术组不表达或微量表达，SCI组beclin-1蛋白表达的神经元细胞数与假手术组在相同时间、相同距离处比较明显增加（P＜0.05）;EGCG组与SCI组相比较，Beclin-1阳性表达神经元数明显增加(P＜0.05)，SCI后6h出现Beclin-1阳性表达神经元细胞，3d时阳性细胞表达达高峰，持续表达7d。 结论:1、EGCG能明显改善脊髓损伤大鼠的运动功能。2、脊髓损伤后自噬激活，并能维持一定时间。3、EGCG能明显增加脊髓损伤后神经元细胞自噬相关蛋白Beclin-1和LC3的表达，对脊髓损伤具有一定的保护作用。