【摘 要】
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在该研究中,我们首先从人头皮毛囊分离培养成人和胎儿毛乳头细胞,这些细胞具有周期性凝集性生长特性,而且这种特性随着传代次数的增多而逐步丧失.凝集性生长作为毛乳头细胞的
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在该研究中,我们首先从人头皮毛囊分离培养成人和胎儿毛乳头细胞,这些细胞具有周期性凝集性生长特性,而且这种特性随着传代次数的增多而逐步丧失.凝集性生长作为毛乳头细胞的固有特性与其生物学功能密切相关.然后我们应用原位杂交技术证实了HSPCO11和HSPCO16基因在凝集性生长的成人毛乳头细胞和胎儿毛乳头细胞均表达,而二者在传代后失去凝集性生长特性的人毛乳头细胞和人真皮成纤维细胞均不表达,这些结果表明HSPCO11和HSPCO16为凝集性生长毛乳头细胞的特异性表达基因,其表达可能与毛乳头细胞的凝集性生长等生物学特征有关.应用RT-PCR技术,我们从凝集性生长的人毛乳头细胞RNA中扩增到分子量约为430bp的HSPCO11基因开放阅读框cDNA序列,并构建了其真核表达重组质粒pCI-neo/HSPCO11,通过酶切分析和测序鉴定,RT-PCR所克隆的cDNA与GenBank中相应HSPCO11基因序列完全吻合.这些研究结果进一步证明了HSPCO11基因在凝集性生长的人毛乳头细胞特异性表达,其表达可能与毛乳头细胞的凝集性生长、毛囊生长周期的调控等生物学功能有关.而RT-PCR不能对HSPCO11基因进行克隆,HSPCO16基因开放阅读框cDNA序列(约200bp)的克隆使用了基因合成技术,所合成的cDNA在真核表达载体pcDNA3.1(+)进行定向克隆,酶切分析和测序鉴定表明所克隆的cDNA与GenBank中相应HSPCO16基因序列完全吻合.通过以上研究,我们确定了HSPCO11和HSPCO16基因在凝集性生长的人毛乳头细胞特异表达,成功地构建了其真核表达重组质粒,通过基因转染技术对HSPCO11和HSPCO16基因在毛乳头细胞表达的生物学意义进行了探讨,成功地诱导了HSPCO16基因原核重组蛋白在细菌中表达,并对重组蛋白进行了纯化.
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