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银屑病作为一种常见的复发性以慢性炎症反应为特征的皮肤病,银屑病的病理表现中表皮角质形成细胞(keratinocytes, KC)过度增生和异常分化导致角质层的过度增生,角化不全,颗粒层变化,棘层肥厚,表明银屑病发病过程与信号通路有密切相关。银屑病KC细胞-信号转导异常时银屑病特征性病理变化的重要发病机制之一,MAPK可导致NF-κB和活化蛋白等的活化,进而激活炎性因子的基因转录,发展和放大炎症,而银屑病发病过程中NF-κB和MAPK信号通路中可能起到了十分重要的作用。人β-防御素2(HBD-2)最初从银屑病病人皮损组织分离纯化获得。科研人员发现银屑病患者皮损为红斑、丘疹、鳞屑、抓痕、甚至结痂,但很少出现皮肤感染。通过研究HBD-2是银屑病患者皮损相关,但具体机制仍需继续探索,并且中药治疗银屑病疗效显著,但确切作用靶点尚未确定,HBD-2的研究也有助于我们发现中药的作用靶点,从分子生物学角度探讨银屑病的发病机理,将为该类疾病的治疗提供新的思路。角质形成细胞(KCs)活化后释放的IL-1β和TNF-a等细胞因子是HBD-2的强诱导物。IL-1P和TNF-a对HBD-2的诱导过程受NF-κB和MAPK信号通路的调控。NF-κB,MAPK信号通路在银屑病的表皮处于活化状态,主要参与角质形成细胞的过度增殖及角质形成细胞中前炎症因子的过度分泌环节。MAPK信号转导途径还可以诱导初始CD4+T细胞向Thl型或Th2型细胞分化,从而引发不同的免疫反应。其中JNK1诱导CD4+T细胞向Th2分化,JNK2诱导其向Thl分化并能促进Thl型细胞因子的分泌,P38既能诱导Thl分化,也能促进Th2分化。祛银颗粒方药是白彦萍教授自拟方药,祛银颗粒方药具有清热、凉血、解毒的功效,通过动物实验已证明祛银颗粒方药的有效。但其具体作用机制和作用靶点尚不清楚。目的：本研究以揭示清热凉血方药对银屑病体外模型中P38, JNK. NF-κB的表达变化；观察祛银颗粒方药含药血清对体外培养角质形成细胞NF-κB和MAPK信号通路水平的影响及HBD-2的作用机制；通过祛银颗粒方药干预于银屑病的细胞模型研究,阐明其NF-KB, MAPK信号通路与HBD-2相关性；祛银颗粒方药通过影响NF-KB, MAPK信号通路调控银屑病HBD-2的表达发挥疗效提供客观的实验依据。方法：本研究运用国外先进技术制作银屑病体外表皮重建模型并通过观察组织形态,HE染色及免疫组化法验证模型成功与否,为体外研究银屑病提供新模型。银屑病体外表皮重建模型之后可获取符合银屑病形态学、病理及分子生物学特征的皮肤替代物,作为载体供形态学、分子病理和药理研究。选择HaCaT细胞在transwell小室建立银屑病体外表皮重建模型；制备祛银颗粒药物、对照药物(维A酸)及阴性对照(生理盐水)的含药血清,利用免疫组化方法和qPCR方法探讨银屑病的HBD-2表达。加入TNF-α、I L-1α、IL-6、IL-22的混合物,以诱导银屑病相关基因HBD-2高表达及NF-κB和MAPK信号通路活化的细胞学体外模型；在细胞水平上,应用免疫细胞化学、用实时荧光定量PCR、ELISA方法法方法观察HBD-2在体外培养的人表皮角质形成细胞珠HaCaT细胞上表达的特征及NF-κB和MAPK信号通路的影响。并应用Western blot方法祛银颗粒对HBD-2及P-I κB α/Iκ B α, P-P38/P38, P-JNK1/JNK1和P-JNK2/JNK2能磷酸化NF-Kb和MAPK并调节的影响。结果：(1)利用HaCaT细胞在transwell小室中成功建立了一种新的银屑病体外皮肤重建模型。经HE染色及免疫组化法验证模型的稳定性好,可重复性强,为银屑病的体外研究提供了一种符合银屑病形态学、病理及分子生物学特征的皮肤替代物,可将其作为载体进行银屑病的形态学、分子病理和药理研究,有利于治疗银屑病有效药物的筛选研究,为银屑病的基础研究提供了一种新方法、新工具,具有一定的经济价值。(2)运用免疫组化、qPCR、ELISA等方法研究发现祛银颗粒方药可以明显下调银屑病细胞学体外模型及培养上清中HBD-2的表达,效果与阳性对照药物(维A酸)相当。(3)通过Western blot法检测发现祛银颗粒方药可以明显下调P-I κ B a、P-P38、P-JNK1和P-JNK2蛋白的相对含量,抑制NF-κ B、P38MAPK及JNKMAPK信号通路的活化。清热凉血方药治疗银屑病的可能机制是通过抑制NF-κB, P38MAPK及JNKMAPK信号通路,阻断IL-1α、TNF-α, IL-6及IL-22对HBD-2的激活。结论：祛银颗粒方药可明显下调细胞学银屑病体外表皮重建模型及培养上清中HBD-2的表达,效果与阳性对照药物相当,优于阴性对照组。祛银颗粒方药可通过抑制JNK2,MAPK信号通路,阻断IL-1α, TNF-α, IL-6, IL-22对HBD-2的激活,从而发挥其治疗银屑病的作用。