肺癌是全球发病率和死亡率最高的恶性癌症,肺癌的治疗方案以化疗和靶向药为主,化疗往往伴随着严重的副作用,靶向药治疗也非常容易产生耐药性,因此,研发有治疗效果且副作用少的药物是肺癌治疗的发展方向之一。从羊栖菜中提取的多糖具有多种生物学效应,如降血脂、抗凝血、抗氧化、抗病毒和免疫刺激等。已有的对羊栖菜多糖和其它褐藻多糖的抗肺癌活性的文献表明了这些多糖具有促进肺癌细胞凋亡以及促进化疗药物效果的作用,而羊栖菜多糖的抗肺癌疗效有待进一步开发,因此我们对其进行了研究。本实验的研究对来自羊栖菜的硫酸化半乳岩藻聚糖HFSGF进行了结构解析,探究其在体外细胞实验中在不同浓度和时间下对A549细胞增殖的抑制,以及在体内实验中对A549异种移植瘤生长的抑制效果,并对其在转录和翻译水平上对A549细胞的影响进行了研究。主要实验结果如下:1.从羊栖菜中提取了多糖组分HFSGF,经过阳离子交换和醇沉,上清液命名为HFSGF-S,沉淀命名为HFSGF-C。HFSGF-C进一步经过P-10凝胶柱洗脱获得两种分级组分HFSGF-L和HFSGF-H。化学组分分析表明了HFSGF是一种硫酸化半乳岩藻聚糖。结合众多实验结果,证明了HFSGF-L是HFSGF的支链,它是由硫酸化半乳糖和硫酸化岩藻糖交替的结构,而HFSGF-H是HFSGF的主链以及部分支链,是由硫酸化甘露糖和硫酸化葡萄糖醛酸交替组成的,HFSGF由两条链连接组成,其中支链的岩藻糖的C1位和主链的甘露糖的C3位连接。2.本实验研究了HFSGF、HFSGF-L和HFSGF-H对A549细胞生长的抑制情况以及HFSGF-L和HFSGF-H对A549细胞迁移的抑制情况。细胞活力实验表明HFSGF、HFSGF-L和HFSGF-H三种样品均能抑制A549细胞的生长。HFSGF的抑制率最高,HFSGF-H其次,HFSGF-L的抑制率最低。实验结果表明HFSGF可能因为含有较多杂质所以具有较强的细胞毒作用,因而不适合进行后续的实验探究。细胞划痕实验的结果表明HFSGF-L和HFSGF-H在部分条件下显著抑制了A549细胞的迁移。3.通过在裸鼠的皮下注射A549细胞悬液建立裸鼠异种移植肿瘤模型。待实体瘤的体积到100 mm~3后分为模型组和两个实验组,每日分别腹腔注射等体积的生理盐水、HFSGF-L和HFSGF-H,且HFSGF-L和HFSGF-H的剂量都是每日100 mg/kg,观察并记录裸鼠体重变化和瘤体体积变化,并于解剖后称量裸鼠各个脏器的重量,计算脏器系数。实验结果表明HFSGF-H与模型组相比肿瘤生长抑制率达到了约50%,同时实验组与模型组裸鼠仅有脾脏和肾脏的脏器系数有显著差异,说明了HFSGF-H对裸鼠无毒副作用。由于体内荷瘤实验与体外细胞实验的结果较为吻合,证明HFSGF-H在体内和体外均有较好的抗肺癌活性。4.本实验对于HFSGF-L和HFSGF-H作用于A549细胞后在转录和翻译层面对A549细胞的m RNA和蛋白质表达的变化进行了研究。发现HFSGF-H显著降低了A549细胞的FAK、p-AKT和m TOR蛋白表达量,推测这是HFSGF-H具有良好的抑制肺癌细胞生长的机制之一。