白色念珠菌（Candida albicans）,是一种兼性厌氧的真菌,有酵母态与菌丝态两种形态,能够引起口腔、食道与阴道等处的局部粘膜感染。新生隐球菌（Cryptococcus neoformans）是一种担子菌真菌,主要引起脑膜的亚急性和慢性感染。白色念珠菌和新生隐球菌感染是最常见的两种真菌感染,由于治疗真菌感染药物的过度应用,真菌耐药问题愈演愈烈,寻找能有效治疗这两种真菌感染的新型药物具有重要的现实意义。研究发现传统中药中的活性物质对于治疗真菌感染具有得天独厚的优势。因此,本研究旨在探究传统中药白花丹中活性成分白花丹素对白色念珠菌和新生隐球菌单菌和混菌的抗真菌作用及其机制,为白花丹素作为真菌抑制剂提供了基础理论依据。主要研究内容如下:1.传统中药白花丹中活性物质的提取及抗真菌活性评价通过乙醇回流法得到白花丹粗提物,利用萃取剂对粗提物成分进行分离检测,分析不同分离部分提取物的抗真菌活性,对具有抗真菌活性的提取物进行进一步分离,使用薄层色谱法进行鉴定。结果表明,白花丹中存在对白色念珠菌和新生隐球菌具有抗真菌活性的物质,经鉴定具备抗真菌活性的化合物为白花丹素。2.白花丹素对白色念珠菌和新生隐球菌的抗真菌和抗生物被膜机制研究采用二倍稀释法和琼脂法测定了白花丹素对白色念珠菌和新生隐球菌单菌和混菌的最低抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度（MFC）。利用结晶紫染色法、激光共聚焦显微镜和扫描电镜等方法定量和定性评价了白花丹素对真菌的细胞膜完整性、代谢活性、粘附性、生物被膜的抑制和清除作用,以及对生物被膜内细胞及持久性细胞的影响。结果表明:白花丹素对真菌单菌培养物的MIC和MFC分别为8 μg/mL和16 μg/mL;对真菌混合物的MIC和MFC为16 μg/mL和32 μg/mL。定性和定量实验表明8 μg/mL的白花丹素破坏了两种真菌细胞膜的完整性、降低了细胞代谢活力、减弱了粘附性以及增强了抗生素对细胞壁的渗透作用。另外,8 μg/mL的白花丹素对单菌和混菌的生物被膜及其基质有抑制作用,128 μg/mL的白花丹素对成熟的生物被膜有清除作用,还证实了生物被膜内持久性细胞的产生与粘附有关。以上结果表明,白花丹素对两种真菌具有抗真菌和抗生物被膜活性。3.白花丹素对白色念珠菌和新生隐球菌的体内抑菌活性研究以秀丽隐杆线虫为模式生物,研究了白花丹素对线虫的寿命影响,利用线虫-真菌感染模型探究白花丹素对受真菌感染后的线虫的体内抑制情况。结果表明,80 μg/mL的白花丹素对线虫的生长无明显影响,8 μg/mL和16μg/mL的白花丹素对被真菌感染的线虫具有保护作用,其平均寿命增加,存活率呈浓度依赖关系。4.白花丹素对白色念珠菌和新生隐球菌生物被膜细胞的转录组学研究通过RNA测序技术对白花丹素处理前后的白色念珠菌和新生隐球菌生物被膜细胞进行了转录组分析,结果显示,白色念珠菌生物被膜细胞实验组中有2398个差异表达基因,而新生隐球菌生物被膜细胞实验组中有2063个差异表达基因。对于白色念珠菌生物被膜细胞,白花丹素可通过下调ALS1和PMT1基因使白色念珠菌生物被膜形成初期的粘附能力减弱,改变EFG1、HGC1、SAP3、NRG1、YWP1基因表达来抑制菌丝体形成,下调MNN14基因改变细胞壁结构以及调节CAT1和SOD5基因来影响氧化应激能力。对于新生隐球菌生物被膜细胞,白花丹素通过上调ERG基因影响生物被膜形成,下调INO1基因来抑制肌醇的生物合成,下调FAS1和FAS2来抑制脂肪酸的合成致使细胞活力减弱,上调PDR802基因的表达来减少荚膜合成以及上调GAT201基因减少黑色素的合成。