蜜蜂和家蚕烟碱型乙酰胆碱受体亚基基因a6和钾离子通道亚基基因shaker的克隆和序列分析

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真核生物RNA的成熟通常需要经历复杂的转录后加工过程,其中包括修饰、异构、附加、编辑和剪接等。A至I RNA编辑是由作用于RNA的腺嘌呤脱氨酶(ADARs)介导的。ADAR是一种RNA编辑酶,它作用于双链RNA(dsRNA)上的腺嘌呤(A)并使之脱氨转变为次黄嘌呤(Ⅰ)。次黄嘌呤翻译过程中通常被识别成鸟嘌呤。 本论文在前人对果蝇、蚊子烟碱型乙酰胆碱受体亚基α 6有关编辑位点和选择性剪接方式研究的基础上,克隆蜜蜂、家蚕α 6基因部分序列并进行序列分析和表达检测。通过对含有编辑位点的果蝇编码区和外显子的BLAST,根据与蜜蜂和家蚕基因组的同源性设计特异引物。提取蜜蜂和家蚕四个发育阶段的总RNA,包括卵、幼虫、蛹和成虫,并从成虫中提取基因组DNA。进行RT-PCR后,通过PCR产物直接测序和克隆后测序,比对eDNA和基因组DINA扩增产物的测序结果,在蜜蜂α 6的外显子5中发现8个编辑位点,家蚕α 6的外显子5中发现5个:同时发现蜜蜂α 6含有三种外显子8序列,并且还发现RNA的A至编辑和选择性剪接存在着某些内在联系。通过九种昆虫氨基酸同源性的比较及分子系统进化树的构建说明,α 6的进化较保守。 离子通道是神经、肌肉和其它组织细胞膜兴奋性的基础,是生物电活动的基础,乙酰胆碱受体属于配体门控型离子通道。对烟碱型乙酰胆碱受体亚基α 6的研究将有助于进一步阐释遗传信息的空间传递模式及其介导的基因表达调控模式。
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