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基质金属蛋白酶组织抑制因子1(tissue inhibitors of metalloproteinase 1,TIMP-1)是一种在生物体内广泛合成的分泌性蛋白,它可以特异性地抑制基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)的活性,在细胞增殖、凋亡和分化方面发挥着重要的作用。虽然TIMP-1所介导的信号通路已被部分阐明,但人们对与TIMP-1相互作用的蛋白却知之甚少。本研究旨在探寻TIMP-1的相互作用蛋白,并验证在细胞中该蛋白与TIMP-1之间的相互关系。我们选择GST pull-down技术寻找与TIMP-1相互作用的蛋白。首先,我们构建了 GST-TIMP-1原核表达质粒,通过大肠杆菌大量表达重组蛋白GST-TIMP-1,并对其进行复性纯化。利用GST pull-down技术,我们找到TIMP-1的相互作用蛋白,并经质谱分析确定该蛋白为膜蛋白AVL9。接着借助激光共聚焦显微镜技术,结果发现这两种蛋白在细胞内具有共定位关系;利用免疫共沉淀技术(Co-IP),结果显示TIMP-1与AVL9可在生理条件下进行结合,进一步提示这两种蛋白存在相互作用。由于AVL9介导了酵母细胞中物质的运输,因此通过干扰AVL9,结果显示乳腺癌细胞系MCF-7及其稳定高表达TIMP-1的细胞株T13细胞TIMP-1分泌量明显下降,而对血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的分泌却无影响,表明了 AVL9介导TIMP-1的分泌是特异性的。最后通过干扰AVL9,发现TIMP-1的拮抗凋亡、抑制迁移的功能减弱,进一步说明了 AVL9参与了 TIMP-1的分泌。我们的研究结果提示AVL9是TIMP-1的相互作用蛋白,并且具有介导TIMP-1分泌的功能。我们的研究丰富了人们对TIMP-1相互作用蛋白的认识,并且为今后TIMP-1的研究提供了新的实验结果和理论依据。