【摘 要】
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目的：探讨腺病毒E1A基因对宫颈癌放疗敏感性的影响及相关的分子生物学机制。方法：将pcDNA3.1(+)-E1A质粒转染入人宫颈癌细胞中,观察各细胞中E1A的表达,采用Western Blot方法检
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目的：探讨腺病毒E1A基因对宫颈癌放疗敏感性的影响及相关的分子生物学机制。方法：将pcDNA3.1(+)-E1A质粒转染入人宫颈癌细胞中,观察各细胞中E1A的表达,采用Western Blot方法检测E1A基因对P53蛋白表达水平的调控及下游生物学行为的相关变化,流式细胞术检测E1A对高危型HPV阳性宫颈癌细胞放疗后凋亡的影响；免疫共沉淀揭示E1A转染入细胞后与E6AP的相互作用,并通过构建体外泛素化系统,探讨E1A、E6、E6AP对P53泛素化水平的影响。结果：宫颈癌细胞内无内源性的E1A表达,通过基因转染技术,E1A能稳定地在人宫颈癌细胞中表达。Western Blot显示E1A能明显增加HPV阳性宫颈癌细胞内p53的表达,HPV阴性的宫颈癌细胞未见到这一生物学效应。流式细胞术显示EIA能显著增加宫颈癌细胞对放疗诱导的凋亡率,该效应与P53的表达升高导致的宫颈癌细胞凋亡密切相关。免疫共沉淀明确E1A能与E6AP形成复合物,体外泛素化证明E1A通过干扰E6/E6AP复合物的形成,减少P53的降解。结论：E1A能促进宫颈癌放疗后细胞的凋亡,机制与E1A干扰E6/E6AP复合物的形成,进而抑制体内P53降解有关。
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