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目的:甲状腺功能异常是妊娠期间常见的内分泌疾病之一,研究表明它的发生与流产、早产、子痫等妊娠不良结局密切相关。多项临床流行病学研究发现妊娠早期TSH>2.5m IU/L的孕妇自然流产（spontaneous abortion,SA）发生的危险性增高。然而目前TSH升高导致流产的具体机制尚未明确。胚胎的成功发育是一系列精细的调节过程,依赖着子宫内膜和胚胎的共同协作。子宫内膜在多种激素的共同调节作用下转变成一种可接受胚胎粘附和植入的状态,称之为“植入窗口期”。许多研究证实子宫内膜对胚胎的粘附性发育障碍可导致流产。除需要容受性的子宫内膜,绒毛膜外滋养层细胞的迁移、侵袭和螺旋动脉重塑也对妊娠至关重要,其障碍可以导致流产等妊娠相关并发症。micro RNA（mi RNA）是一类由内源基因编码的长度约为22个核苷酸的单链非编码RNA分子,其可参与多种疾病的发生和进展。近几年多个研究对流产患者的蜕膜和绒毛组织以及血清进行了mi RNA芯片筛查,发现差异表达的mi RNA与子宫内膜容受性、滋养层侵袭能力甚至流产密切相关。mi R-17-5p可以调节多种肿瘤细胞的增殖、侵袭和凋亡功能,并且在胎停的猪子宫内膜组织中低表达。mi R-29c-5p随着月经周期动态变化并且可以抑制子宫内膜癌的增殖,而mi R-34b-5p也与子宫内膜异位症等妇科疾病有关。我们课题组在之前的研究中进行了亚临床甲减（subclinical hypothyroidism,SCH）合并SA的患者血清mi RNA表达芯片筛查,结果显示与单纯流产和正常妊娠孕妇相比,SCH合并SA患者的血清中mi R-940和mi R-486-5p表达升高。锌指367（zinc finger factor,ZNF367）属于ZNF转录因子家族,具有多种功能,包括DNA识别,RNA包装,转录激活等。最近的研究表明,锌指蛋白参与滋养细胞的侵袭和分化。本文主要研究TSH>2.5m IU/L合并SA的患者绒毛和蜕膜组织中差异表达的mi RNA及其在子宫内膜和滋养层发育过程的作用。方法:第一部分:于2017年9月到2019年4月在中国医科大学附属第一医院计划生育门诊收集TSH>2.5m IU/L合并SA、TSH>2.5m IU/L正常妊娠、TSH正常的SA患者和TSH正常行人工流产的妊娠妇女的血清、绒毛和蜕膜组织,并记录所有参与者的一般信息。每组选取3例参与者的绒毛和蜕膜进行mi RNA测序,通过P值和FC值筛选绒毛和蜕膜组织中差异表达的mi RNA。另外选取上述各组参与者的绒毛、蜕膜组织使用q RT-PCR对筛选出差异的mi RNA进行扩大样本验证;利用Spearman相关检验分析TSH和目标mi RNA的相关性。第二部分:浓度梯度TSH刺激人绒毛膜外滋养层细胞系（HTR-8/SVneo）,通过划痕实验、Transwell实验观察TSH对滋养层迁移和侵袭的影响,通过q RTPCR和Western blotting实验观察TSH对mi R-17-5p表达水平以及侵袭相关蛋白的作用。在HTR-8/SVneo中转染mi R-17-5p inhibitor和mi R-17-5p mimics敲减和过表达mi R-17-5p,并通过q RT-PCR验证转染效率。通过细胞计数（cell counting kit-8,CCK8）实验、划痕实验、Transwell实验和Western blotting检测mi R-17-5p对滋养层细胞增殖、迁移、侵袭及其相关蛋白的影响。选用生信预测软件分析mi R-17-5p潜在的靶基因,敲减和过表达mi R-17-5p后,用q RT-PCR和Western blotting方法检测靶基因的表达水平,并通过荧光素酶实验验证靶向结合关系。在收集的4组绒毛组织中利用Western blotting检测ZNF367蛋白表达水平。转染siZNF367下调ZNF367表达并通过q RT-PCR验证转染效率。通过CCK8实验、划痕实验、Transwell实验和Western blotting检测ZNF367下调对HTR-8/SVneo增殖、迁移、侵袭及其相关蛋白的影响。共转染mi R-17-5p inhibitor和si-ZNF367,观察ZNF367下调后对mi R-17-5p生物学功能的作用。第三部分:在子宫内膜癌细胞系（Ishikawa）中转染mi R-29c-5p和mi R-34b-5p inhibitors/mimics分别敲减和过表达mi R-29c-5p和mi R-34b-5p,并通过q RTPCR验证转染效率。通过CCK8实验、edu实验和粘附性实验检测mi R-29c-5p和mi R-34b-5p对Ishikawa增殖、容受性及其功能相关蛋白的影响。采用生物信息学软件预测mi RNA潜在的靶基因,敲减和过表达mi R-34b-5p后用q RT-PCR检测靶基因的表达水平。结果:第一部分:与正常妊娠组相比,TSH>2.5m IU/L+SA组患者的绒毛样本中有298个差异表达的mi RNA,80个为新发现的mi RNA,mi R-17-5p表达降低且与TSH呈负相关;在蜕膜样本中311个异常表达的mi RNA,69个为新发现的mi RNA,mi R-29c-5p和mi R-34b-5p在TSH>2.5m IU/L合并SA组高表达且与TSH正相关。第二部分:TSH在浓度为10m IU/ml时刺激HTR-8/SVneo,可以抑制mi R-17-5p表达及迁移、侵袭和基质金属蛋白酶（matrix metalloprotein,MMP）蛋白水平。mi R-17-5p过表达促进滋养层细胞增殖、迁移、侵袭和增殖細胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）、MMP蛋白的表达,敲减mi R-17-5p则有抑制作用。mi R-17-5p通过与ZNF367非编码区结合抑制其m RNA和蛋白表达。下调ZNF367促进HTR-8/SVneo的生物学功能且可以部分缓解mi R-17-5p inhibitor对HTR-8/SVneo的抑制作用。第三部分:通过CCK8、edu实验和Western blotting发现mi R-29c-5p和mi R-34b-5p均可以抑制子宫内膜癌细胞（Ishikawa）增殖、容受性及PCNA和整合素的蛋白表达。mi R-34b-5p可以抑制胰岛素样生长因子结合蛋白（insulin-like growth factor binding protein,IGFBP1）、小窝蛋白（caveolin,CAV1）和同源盒C簇（homeobox C8,HOXC8）等与粘附分子相关的指标。结论:1、在TSH>2.5m IU/L合并SA组患者的绒毛组织中,mi R-17-5p表达降低,高浓度TSH能够抑制HTR-8/SVneo细胞迁移、侵袭和mi R-17-5p的表达。mi R-17-5p可以靶向抑制ZNF367表达从而促进HTR-8/SVneo细胞增殖、迁移和侵袭。2、在TSH>2.5m IU/L合并SA组患者的蜕膜组织中,mi R-29c-5p和mi R-34b-5p表达增加且与TSH水平正相关。mi R-29c-5p和mi R-34b-5p过表达可以抑制Ishikawa细胞增殖和容受性并影响PCNA和整合素αV和β1的表达。mi R-34b-5p过表达可以抑制IGFBP1、CAV1和HOXC8等与容受性相关的靶基因m RNA表达。