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目的：通过克唑替尼诱导耐药建立人肺腺癌H2228克唑替尼耐药细胞株,探讨BIM信号通路在克唑替尼(crizotinib)诱导的EML4-ALK融合基因阳性的人肺腺癌细胞H2228细胞株耐药前后凋亡中的作用,以便为了解克唑替尼产生耐药机制和为今后克服耐药提供理论依据。方法：1、克唑替尼按50 nmol/L、100nmol/L、200nmol/L、500nmol/L、1000 nmol/L的浓度逐步递增法诱导人肺腺癌H2228细胞获得性耐药株H2228/CR;2、用不同浓度的克唑替尼分别处理处于对数生长期的EML4-ALK阳性肺腺癌H2228细胞株和耐药细胞株,并采用MTT比色法检测细胞增殖抑制情况,并分别计算出克唑替尼在不同细胞的半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration, IC50)值；3、根据IC50值选用合适浓度的克唑替尼在不同时间(24h,48h,72h)处理H2228细胞和H2228/CR细胞,运用Annexin V流式细胞仪分别检测细胞凋亡率；4、采用Western blotting检测不同浓度克唑替尼作用72h后(0nm、300 nm 1000 nm)H2228和H2228/CR细胞之间BIM信号通路关健分子ALK、 p-ALK、ERK、p-ERK及BIM (Bim-s、Bim-L、Bim-exL)蛋白表达变化。结果：1、经过8个月时间成功诱导了克唑替尼耐药细胞株H2228/CR;2、MTT比色法计算出结果显示H2228/CR细胞在不同浓度克唑替尼作用下的抑制率低于H2228细胞(P<0.05)；3、MTT比色法计算出H2228/CR细胞和H2228细胞的IC50分别为3418nmol/L、335nmol/L, H2228/CR细胞对H2228细胞的耐药(resistance index, RI)指数为10.20;4、Annexin V流式细胞仪结果显示克唑替尼对H2228细胞有促凋亡作用,且呈时间依赖性(P<0.05),H2228/CR细胞的凋亡率明显低于H2228细胞的凋亡率(P<0.05)；5、Western blotting检测到H2228细胞的ALK磷酸化水平降低,同时ERK磷酸化水平下调,BIM的三个异构体Bim-s、Bim-L、Bim-exL蛋白表达水平上调；而H2228/CR细胞ALK、ERK的磷酸化水平无明显变化,BIM蛋白表达水平也无明显变化。结论：利用克唑替尼建立了人肺腺癌H2228耐药细胞株H2228/CR,通过检测细胞抑制率、细胞凋亡及BIM蛋白质表达水平,初步证实了BIM与克唑替尼诱导EML4-ALK阳性肺癌细胞株H2228耐药有关,可能耐药产过程中发挥调控作用。