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目的:初步筛选蓝布正抗血管性痴呆作用活性部位，研究蓝布正最佳活性部位对血管性痴呆大鼠ROS、iNOS、SODI、keap1、Nrf2、HO-1表达的影响;从抗氧化角度探究其干预血管性痴呆作用机制;并进一步研究蓝布正抗血管性痴呆的确切有效成分。
方法:(1)蓝布正抗血管性痴呆作用活性部位初步筛选:1.蓝布正不同极性部位的提取:蓝布正经水煎煮后，用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，制备蓝布正石油醚、乙酸乙酯、正丁醇及水部位;2.急性毒性实验:SPF级KM小鼠150只，给予蓝布正四个萃取部位最大浓度最大剂量灌胃，观察小鼠的活动状态及死亡情况;3.蓝布正活性部位的初步筛选:SPF级SD雄性大鼠112只，经Morris水迷宫筛选后，随机分为假手术组、模型组、阳性组(吡拉西坦组)、蓝布正石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水部位组。除假手术组只分离双侧颈总动脉不予结扎外，其余6组永久性结扎双侧颈总动脉。假手术组不做任何干预，模型组每日一次生理盐水灌胃，蓝布正石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水部位组每日3.5g/kg(生药量)。吡拉西坦每日0.56g/kg进行灌胃，连续进行两个月。两月后正式进行水迷宫检测，检测完毕次日麻醉大鼠取脑组织，进行HE染色观察海马组织形态变化，筛选出蓝布正抗血管性痴呆最佳活性部位。(2)蓝布正水部位抗血管性痴呆作用机制研究:SPF级SD雄性大鼠108只，经Morris水迷宫筛选后，随机分为假手术组、模型组、阳性组(银杏叶组)蓝布正水部位高、中、低剂量组。除假手术组只分离双侧颈总动脉不予结扎外，其余5组永久性结扎双侧颈总动脉。以蓝布正水部位高剂量686mg/kg,蓝布正中剂量343mg/kg,蓝布正低剂量171.5mg/kg,银杏叶分散片8.4mg/kg每日一次进行灌胃，假手术组不做任何干预，模型组用等体积生理盐水每日一次进行灌胃，连续两个月。用Morris水迷宫进行检测，检测完毕的次日，麻醉后取脑组织。用HE染色检测大鼠海马组织形态变化情况;用免疫组化法检测海马组织中ROS、iNOS、SOD1、HO-1的表达变化;用Western blot法检测海马组织中keap1、Nrf2、HO-1蛋白表达情况。
结果:(1)蓝布正抗d血管性痴呆作用活性部位初步筛选结果:1.蓝布正不同极性部位提取结果:石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水部位提取率分别为:0.075％、0.19％、0.85％、9.8％。2.急性毒性实验结果:小鼠日常活动无异常，未见死亡情况发生。3.蓝布正活性部位初步筛选结果:Morris水迷宫检测结果:与假手术组比较，模型组大鼠逃避潜伏期显著增加，穿越平台的次数减少(P＜0.01);与模型组比较，蓝布正水部位组大鼠逃避潜伏期显著减少，穿越平台的次数显著增加(P＜0.01)。HE染色结果:与假手术组比较，模型组大鼠海马神经细胞排列紊乱，疏松，细胞核皱缩。与模型组比较，药物干预组海马神经细胞形态变化有所改善，尤以蓝布正水部位组改善最为显著。(2)蓝布正水部位抗血管性痴呆作用机制研究结果:Morris水迷宫检测结果:与假手术组比较，模型组大鼠逃避潜伏期显著增加，穿越平台的次数减少(P＜0.01);与模型组比较，蓝布正水部位高、中剂量组大鼠逃避潜伏期显著减少,穿越平台的次数显著增加(P＜0.05，P＜0.01)。HE染色结果:与假手术组比较，模型组大鼠海马神经.细胞排列紊乱，不规则，神经细胞减少。与模型组比较，蓝布正水部位各组大鼠海马神经细胞形态改善，细胞排列较紧密、规整，结构清晰。免疫组化检测结果:与假手术组比较，模型组大鼠海马组织中ROS、iNOS、HO-1蛋白表达显著增多(P＜0.01)，SOD1蛋白表达显著降低(P＜0.01)。与模型组比较，蓝布正高、中剂量组大鼠海马ROS、iNOS蛋白表达显著下降(P＜0.01),蓝布正水部位高、中剂量组大鼠海马SOD1、HO-1蛋白的表达显著升高(P＜0.01)，其中蓝布正水部位低剂量组大鼠海马SODI蛋白表达也显著升高(P＜0.01)。Western blot检测结果:与假手术组比较，模型组keap1、HO-1蛋白表达升高，Nrf2蛋白表达降低。与模型组比较，用药后keap1蛋白表达降低，Nrf2蛋白表达升高(P＜0.01)，HO-1较药物干预前进一步升高(P＜0.01)。
结论:经不同极性溶液萃取并筛选后，蓝布正水部位具有显著的抗氧化损伤活性。在抗氧化方面，蓝布正水部位可在一定程度上干预血管性痴呆大鼠海马组织中ROS、iNOS、SOD1、HO-1、keap1和Nrf2蛋白的表达，与临床常用药物银杏叶分散片作用相近。蓝布正水部位可能通过降低海马组织中促氧化蛋白ROS、iNOS、keap1的表达，增加抗氧化蛋白SOD1、HO-1、Nrf2的表达，抑制氧化损伤，从而改善血管性痴呆大鼠的学习记忆能力。
方法:(1)蓝布正抗血管性痴呆作用活性部位初步筛选:1.蓝布正不同极性部位的提取:蓝布正经水煎煮后，用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，制备蓝布正石油醚、乙酸乙酯、正丁醇及水部位;2.急性毒性实验:SPF级KM小鼠150只，给予蓝布正四个萃取部位最大浓度最大剂量灌胃，观察小鼠的活动状态及死亡情况;3.蓝布正活性部位的初步筛选:SPF级SD雄性大鼠112只，经Morris水迷宫筛选后，随机分为假手术组、模型组、阳性组(吡拉西坦组)、蓝布正石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水部位组。除假手术组只分离双侧颈总动脉不予结扎外，其余6组永久性结扎双侧颈总动脉。假手术组不做任何干预，模型组每日一次生理盐水灌胃，蓝布正石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水部位组每日3.5g/kg(生药量)。吡拉西坦每日0.56g/kg进行灌胃，连续进行两个月。两月后正式进行水迷宫检测，检测完毕次日麻醉大鼠取脑组织，进行HE染色观察海马组织形态变化，筛选出蓝布正抗血管性痴呆最佳活性部位。(2)蓝布正水部位抗血管性痴呆作用机制研究:SPF级SD雄性大鼠108只，经Morris水迷宫筛选后，随机分为假手术组、模型组、阳性组(银杏叶组)蓝布正水部位高、中、低剂量组。除假手术组只分离双侧颈总动脉不予结扎外，其余5组永久性结扎双侧颈总动脉。以蓝布正水部位高剂量686mg/kg,蓝布正中剂量343mg/kg,蓝布正低剂量171.5mg/kg,银杏叶分散片8.4mg/kg每日一次进行灌胃，假手术组不做任何干预，模型组用等体积生理盐水每日一次进行灌胃，连续两个月。用Morris水迷宫进行检测，检测完毕的次日，麻醉后取脑组织。用HE染色检测大鼠海马组织形态变化情况;用免疫组化法检测海马组织中ROS、iNOS、SOD1、HO-1的表达变化;用Western blot法检测海马组织中keap1、Nrf2、HO-1蛋白表达情况。
结果:(1)蓝布正抗d血管性痴呆作用活性部位初步筛选结果:1.蓝布正不同极性部位提取结果:石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水部位提取率分别为:0.075％、0.19％、0.85％、9.8％。2.急性毒性实验结果:小鼠日常活动无异常，未见死亡情况发生。3.蓝布正活性部位初步筛选结果:Morris水迷宫检测结果:与假手术组比较，模型组大鼠逃避潜伏期显著增加，穿越平台的次数减少(P＜0.01);与模型组比较，蓝布正水部位组大鼠逃避潜伏期显著减少，穿越平台的次数显著增加(P＜0.01)。HE染色结果:与假手术组比较，模型组大鼠海马神经细胞排列紊乱，疏松，细胞核皱缩。与模型组比较，药物干预组海马神经细胞形态变化有所改善，尤以蓝布正水部位组改善最为显著。(2)蓝布正水部位抗血管性痴呆作用机制研究结果:Morris水迷宫检测结果:与假手术组比较，模型组大鼠逃避潜伏期显著增加，穿越平台的次数减少(P＜0.01);与模型组比较，蓝布正水部位高、中剂量组大鼠逃避潜伏期显著减少,穿越平台的次数显著增加(P＜0.05，P＜0.01)。HE染色结果:与假手术组比较，模型组大鼠海马神经.细胞排列紊乱，不规则，神经细胞减少。与模型组比较，蓝布正水部位各组大鼠海马神经细胞形态改善，细胞排列较紧密、规整，结构清晰。免疫组化检测结果:与假手术组比较，模型组大鼠海马组织中ROS、iNOS、HO-1蛋白表达显著增多(P＜0.01)，SOD1蛋白表达显著降低(P＜0.01)。与模型组比较，蓝布正高、中剂量组大鼠海马ROS、iNOS蛋白表达显著下降(P＜0.01),蓝布正水部位高、中剂量组大鼠海马SOD1、HO-1蛋白的表达显著升高(P＜0.01)，其中蓝布正水部位低剂量组大鼠海马SODI蛋白表达也显著升高(P＜0.01)。Western blot检测结果:与假手术组比较，模型组keap1、HO-1蛋白表达升高，Nrf2蛋白表达降低。与模型组比较，用药后keap1蛋白表达降低，Nrf2蛋白表达升高(P＜0.01)，HO-1较药物干预前进一步升高(P＜0.01)。
结论:经不同极性溶液萃取并筛选后，蓝布正水部位具有显著的抗氧化损伤活性。在抗氧化方面，蓝布正水部位可在一定程度上干预血管性痴呆大鼠海马组织中ROS、iNOS、SOD1、HO-1、keap1和Nrf2蛋白的表达，与临床常用药物银杏叶分散片作用相近。蓝布正水部位可能通过降低海马组织中促氧化蛋白ROS、iNOS、keap1的表达，增加抗氧化蛋白SOD1、HO-1、Nrf2的表达，抑制氧化损伤，从而改善血管性痴呆大鼠的学习记忆能力。