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本试验在脾虚犬饲粮中添加加味四君子汤,旨在研究加味四君子汤对脾虚犬体征及体质量、生理生化指标、胰腺消化酶活性、小肠形态及其消化吸收功能、小肠表皮生长因子(EGF)和生长抑素(SS)蛋白表达水平及其mRNA相对表达量以及肠道菌群多样性的影响。选择1岁龄的比格犬24只,随机平均分为4组,分别为对照组、脾虚组、自然恢复组、中药恢复组。对照组犬饲喂基础饲粮;其余3组犬饲喂基础饲粮并每天以6 mL/kg灌喂番泻叶水煎液,上下午各一次,构建脾虚模型。模型构建成功后,将脾虚组犬解剖采样,中药恢复组犬饲喂添加加味四君子汤的饲粮(每50 g添加1 mL),自然恢复组犬饲喂基础饲粮。试验期间观察各组犬的体征变化。分别在第0,7,14天称量试验犬体重,采血测定血常规指标(白细胞(WBC)数、淋巴细胞(LYM)数、中性粒细胞(Neut)数、红细胞(RBC)数、血红蛋白(HGB)含量、红细胞压积(HCT)、血小板(PLT)数),并分离血清测定生化指标(丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、血糖(GLU)、胆红素(TBIL)含量)以及D-木糖含量。第14天,全部犬解剖采集胰腺组织于液氮中,检测胰消化酶活性;采集犬十二指肠、空肠中段、回肠,分成数分保存于多聚甲醛固定液、戊二醛固定液及液氮中,固定液中的组织用于HE染色法(Hematoxylin-eosin staining)测定小肠绒毛长度、隐窝深度及V/C值,免疫组化法(Immunohistochemistry,IHC)检测小肠中EGF、SS蛋白的表达以及电镜观察小肠形态,液氮中的组织用于qRT-PCR法检测小肠中EGF、SS的mRNA的相对表达量以及蛋白免疫印迹(western-blot)法检测EGF、SS的蛋白表达水平;采集直肠内容物于液氮中用于Illumina测序法进行肠道多样性分析。结果显示:第7天,脾虚组犬出现明显脾虚症状。1.第0天时,各组犬各类指标均无显著差异。第7天时,与对照组犬相比,脾虚犬体质量极显著降低(P<0.01);血液中WBC、LYM数量,血清TP含量及胰腺组织中淀粉酶、脂肪酶、胃蛋白酶活性显著降低(P<0.05),RBC数量、HGB含量、HCT及血清ALB、GLU、D-木糖含量极显著降低(P<0.01),天门冬氨酸氨基转移酶活性显著升高(P<0.05)、胆红素含量极显著升高(P<0.01)。2.电镜下观察,脾虚组犬小肠微绒毛稀疏且部分断裂、缺损,细胞器结构损伤。与对照组犬相比,脾虚组犬肠绒毛长度极显著降低(P<0.01),隐窝深度极显著升高(P<0.01),V/C值极显著降低(P<0.01)。3.与对照组犬相比,脾虚组犬小肠各段EGF mRNA相对表达量显著降低(P<0.05)蛋白表达量极显著降低(P<0.01)。脾虚组犬小肠各段SS mRNA相对表达量显著升高(P<0.05);十二指肠、空肠蛋白表达量极显著升高(P<0.01),回肠蛋白表达量显著升高(P<0.05)。4.1)通过对粪样菌群Alpha多样性(Alphadiversity)进行分析后得出脾虚组犬肠道菌群多样性均低于对照组犬。2)与对照组犬相比,脾虚组犬拟杆菌门(Bacteroidetes)显著下降(P<0.05),梭杆菌门(Fusobactria)、变形菌门(Proteobacteria)显著升高(P<0.05);拟杆菌纲(Bacteroidia)显著降低(P<0.05),纤毛菌纲(Fusobacteriia)显著升高(P<0.05);拟杆菌目(Bacteroidales)显著降低(P<0.05),梭杆菌目(Fusobacteriales)显著升高(P<0.05);梭杆菌科(Fusobacteriaceae)显著升高(P<0.05),悬钩子科(Paraprevotellaceae)显著降低(P<0.05);梭菌属(Fusobacterium)显著升高(P<0.05),普式菌属(Prevotella)显著降低(P<0.05)。第14天时,脾虚犬经加味四君子汤治疗后,各项指标均恢复到接近对照组犬水平。试验证实,加味四君子汤能够使脾虚犬的体征及体质量、生理生化指标、小肠形态及其消化吸收功能、EGF、SS蛋白表达量及其mRNA相对表达量以及肠道菌群结构恢复正常,对犬脾虚证有明显的治疗效果。