高盐抑制Min6细胞胰岛素分泌功能及其机制研究

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糖尿病已成为继肿瘤、心血管病之后第三大威胁人类健康的慢性疾病,在中国患病率逐年增高且呈快速上升趋势。2型糖尿病患者胰岛β细胞分泌功能下降,存在胰岛素抵抗。因此,保存胰岛细胞分泌功能,对于糖尿病的防治有重要意义。高盐饮食是目前重要的全球话题,流行病学显示,高盐饮食与人类糖尿病发生存在一定关系。小鼠胰岛Min6细胞系是胰岛素分泌研究中常用的细胞模型。本实验主要研究高盐环境能否影响Min6细胞胰岛素分泌,并对其机制进行初步探究。目的研究高盐环境能否影响Min6细胞分泌功能,并探讨其可能机制。方法利用购买的小鼠胰岛Min6细胞系,设置3组,分别是:对照组(正常培养条件);高盐组(50mmol·L-1氯化钠刺激);甘露醇组(100mmol·L-1甘露醇刺激)。其中甘露醇组能够与高盐组产生相同渗透压。选择给药后24h、48h及72h时间点检测各项结果。首先,观察高盐刺激对Min6细胞胰岛素分泌量影响。用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测Min6细胞胰岛素分泌量。其次,观察高盐刺激对Min6细胞增殖活性影响。先应用台盼蓝染色法检测给药刺激前Min6活细胞数,确定本实验中培养的Min6细胞存活状况良好。然后应用细胞活性检测试剂盒(cck8)检测Min6细胞增殖抑制率。最后,观察高盐刺激对Min6细胞凋亡的影响。应用Hoechst 33258染色法检测Min6凋亡细胞数,Annexin V FITC/PI双染流式细胞术检测Min6凋亡细胞百分比。然后应用Western blot检测Min6细胞内B细胞淋巴瘤-2(B-cellymphoma-2,bcl-2)蛋白的表达量。比较对照组和高盐组48h时间点Min6细胞内bcl-2蛋白表达量有无显著性差异。结果首先,在各观察时间点,高盐组Min6细胞胰岛素分泌量与对照组相比均显著降低,该作用随高盐刺激时间延长而增加。各观察时间点甘露醇组与对照组相比,细胞胰岛素分泌量均没有显著差异。其次,本实验中培养的Min6细胞存活状况良好,死亡细胞比例小于2%,适宜用于后续细胞增殖抑制率实验检测。检测结果显示,在各观察时间点,高盐组Min6细胞增殖抑制率与对照组相比均显著增加,该作用随高盐刺激时间延长而增加。甘露醇组经24h与48h刺激后,细胞增殖抑制率与对照组相比没有显著差异;经72h刺激后,细胞增殖抑制率与对照组相比显著增加。但72h刺激的高盐组较甘露醇组细胞增殖抑制率增加更明显,且有显著性差异。最后,Hoechst 33258染色实验显示,在各观察时间点,高盐组Min6细胞凋亡细胞数与对照组和甘露醇组相比均明显增加。Annexin V FITC/PI双染流式细胞术验证了在各观察时间点,高盐组Min6凋亡细胞百分比与对照组相比均显著增加,甘露醇组凋亡细胞百分比与对照组相比均没有显著差异。同时,与对照组相比,高盐组Min6细胞内bcl-2蛋白表达量显著降低。结论1.高盐减少Min6细胞胰岛素分泌,该作用随高盐刺激时间延长而增加,且与渗透压无关。2.高盐抑制Min6细胞增殖活性,该作用随高盐刺激时间延长而增加;同渗透压的甘露醇无此作用。这可能是高盐减少Min6细胞胰岛素分泌的原因之一。3.高盐通过抑制Min6细胞内bcl-2蛋白的表达,促进Min6细胞凋亡,该作用随高盐刺激时间延长而增加,且与渗透压无关。这是高盐减少Min6细胞胰岛素分泌的可能机制之一。
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