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目前,胃癌在全世界人口的死亡原因中仍占主导地位。1991年Soman等~[1]应用逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)法在胃癌组织中检测到c-MET mRNA是过量表达的,揭示c-MET是一种新的与胃癌相关的原癌基因。近年来有人采用实时荧光定量PCR及Western blotting检测了正常胃粘膜细胞株GES-1及胃癌细胞株MKN-45及SGC7901 c-Met的表达情况,表明三株细胞c-Met都有一定量的表达,且两株胃癌细胞株c-Met的表达量显著高于正常胃粘膜细胞株,且以中分化胃癌细胞SGC7901的c-Met表达量最高~[2]。本实验通过选择正常胃粘膜细胞GES-1及两株胃癌细胞株MKN-45及SGC7901~[3],观察重组免疫毒素抗c-Met/PE38KDEL对胃癌细胞增殖及凋亡的影响,为c-Met阳性肿瘤的治疗提供实验依据。目的观察重组免疫毒素(IT)抗c-Met/PE38KDEL对胃癌细胞的增殖抑制作用并探讨其作用机制,为胃癌的导向治疗奠定基础。方法通过Western Blot检测胃癌细胞MKN-45及SGC7901及正常胃黏膜细胞GES-1 c-Met的表达情况;分别用不同浓度IT处理胃癌细胞MKN-45及SGC7901及正常胃黏膜细胞GES-1, CCK-8试剂盒检测24、48h细胞增殖抑制率;[3H]-亮氨酸掺入法测定重组免疫毒素抗c-Met/PE38KDEL对三种细胞5、24h蛋白合成抑制的影响;通过流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期的变化;Caspase试剂盒检测不同浓度重组免疫毒素抗c-Met/PE38KDEL作用于细胞后caspase-3、caspase-8活性变化;最后通过Western Blot进一步检测caspase-3活性的变化。结果1.通过Western blotting检测胃癌细胞MKN-45,SGC7901及正常胃黏膜细胞GES-1的c-Met的表达情况发现胃癌细胞MKN-45,SGC7901比正常胃黏膜细胞GES-1的c-Met的表达量高,有显著性差异(P<0.01) ;2.经不同浓度重组免疫毒素抗c-Met/PE38KDEL作用后,两株胃癌细胞的增殖率及蛋白合成都有明显的降低,呈时间和剂量依赖性,当重组免疫毒素抗c-Met/PE38KDEL浓度为10 ng/ml与100 ng/ml时,对两株细胞的增殖率及蛋白合成抑制作用最强(P<0.01);3.流式细胞学显示,随着重组免疫毒素抗c-Met/PE38KDEL浓度的增加,两株胃癌细胞凋亡率逐渐升高,MKN-45和SGC7901两株细胞在重组免疫毒素抗c-Met/PE38KD浓度为50 ng/ml时凋亡率分别为19.19% (P<0.01)及27.37% (P<0.01);4. caspase活性测定显示,对照组相比,重组免疫毒素抗c-Met/PE38KDEL浓度为100ng/ml时两株胃癌细胞caspase-3都有显著增高(P<0.05),但caspase-8升高不如caspase-3显著,说明caspase-3在重组免疫毒素抗c-Met/PE38KDEL诱导胃癌细胞凋亡的过程中可能发挥更为重要的作用。