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研究背景肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC;本论文中简称为肝癌)是临床上最常见的消化道恶性肿瘤,高居我国恶性肿瘤年致死率的第二位,严重威胁我国人民的生命健康。目前肝癌的治疗策略仍是基于肝癌手术切除的综合治疗,然而多数肝癌患者确诊时已丧失手术机会,且肝癌术后易复发转移,从而极大地限制了肝癌整体疗效的进一步提高。因此,深入研究肝癌的发病机理并筛选合适的分子靶标对于肝癌的治疗非常重要。MicroRNA(miRNA)是一类内源性非编码小RNA,长度一般约为18-25nt。其主要在转录后水平通过调控靶基因的信使RNA,与其3’非翻译区(3’-Untranslated Region,3’-UTR)的特定序列结合来发挥作用。诸多的研究已显示,miRNA广泛影响肿瘤细胞的增殖、凋亡、侵袭转移等生物学功能。因此,我们尝试利用公共数据库中的miRNA表达谱芯片数据和高通量测序数据筛选在肝癌中具有表达差异的miRNA,以期发现新的肝癌治疗靶点。研究目的使用公共数据库筛选出差异表达的miRNAs,分析其在具有不同侵袭转移潜能的肝癌细胞系中的表达水平,并进而研究该miRNA在肝癌细胞增殖、侵袭及迁移运动能力等方面的作用,从而为肝癌靶向治疗提供潜在的靶点及理论依据。研究方法1.下载来自GEO数据库中的miRNA表达谱芯片数据(GSE22058)和来自TCGA数据库中的miRNA-seq(TCGA-LIHC)数据,分析数据并筛选得到同时在两个数据集中表达上调的hsa-miR-184作为后续研究。2.采用实时荧光定量PCR测定hsa-miR-184在SMMC-7721、Bel-7402和SK-HEP-1这三种具有不同侵袭转移潜能的肝癌细胞系和HL-7702正常肝细胞系中的表达水平,并采用慢病毒介导的基因转导技术构建hsa-miR-184过表达和对照组SMMC-7721肝癌细胞系。3.应用MTT生长曲线、划痕实验、Transwell侵袭实验和Transwell转移实验检测两组细胞在增殖、迁移、侵袭及转移能力等方面的变化。研究结果1.分析来自公共数据库中的数据显示,hsa-miR-184同时在GSE22058和TCGA-LIHC两个数据集中表达上调,hsa-miR-30e-3p、hsa-miR-429、hsa-miR-133b、hsa-miR-142-5p、hsa-miR-326在两个数据集中表达下调。我们选定hsa-miR-184开展进一步研究。2.实时荧光定量PCR结果显示,hsa-miR-184在三株肝癌细胞系中表达水平明显高于正常肝脏细胞系(p<0.05),且hsa-miR-184表达水平在具有高侵袭转移潜能的SK-HEP-1肝癌细胞系中最高(9.397±0.107),在中等侵袭转移潜能的Bel-7402肝癌细胞系次之(8.513±0.085),在低侵袭转移潜能的SMMC-7721肝癌细胞系中最低(7.900±0.072)。hsa-miR-184过表达的SMMC-7721肝癌细胞中hsa-miR-184基因的表达水平明显高于对照组(3.901±0.828比1.014±0.210,P=0.004),且两组细胞均生长良好。3.与对照组细胞相比,hsa-miR-184过表达组SMMC-7721细胞增殖能力明显上升(第5天细胞增殖倍数:5.199±0.038比3.464±0.012,p<0.0001),细胞迁移运动能力增强(48小时迁移率:51.830±1.260比35.540±2.290,p<0.0001),转移能力(转移率:1.820±0.020比1.000±0.040,p<0.0001)和侵袭能力(侵袭率:1.980±0.060比1.000±0.040,p<0.0001)明显增强。结论1.hsa-miR-184、hsa-miR-30e-3p、hsa-miR-429、hsa-miR-133b、hsa-miR-142-5p及hsa-miR-326等在人类肝癌组织中表达上调或下调,提示这些micro RNA可能参与了肝癌的发生发展过程。2.hsa-miR-184在肝癌细胞系中表达上调,且表达上调程度与肝癌细胞系的侵袭转移潜能相关。过表达低侵袭转移潜能的SMMC-7721肝癌细胞系中的hsa-miR-184可促进该细胞系的增殖、侵袭和转移,提示hsa-miR-184可能是一个肝癌治疗的潜在靶点。