【摘 要】
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根据已报道的鸡淋巴细胞趋化因子（ChLptn）的cDNA序列中的开放阅读框架序列设计特异性引物,以科宝鸡的脾脏脾淋巴细胞的总RNA为模板进行RT-PCR。将PCR产物经琼脂糖凝胶电泳后回收,与克隆载体pGEM-T easy连接后,并转化E. coli DH 5α,在含氨苄青霉素的LB平板上选择培养后,挑取白色菌落于LB液体培养基中振荡培养。用此培养物作模板,进行PCR鉴定。将PCR鉴定为阳性的转化
【基金项目】
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国家高技术研究发展计划（863计划）；
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根据已报道的鸡淋巴细胞趋化因子（ChLptn）的cDNA序列中的开放阅读框架序列设计特异性引物,以科宝鸡的脾脏脾淋巴细胞的总RNA为模板进行RT-PCR。将PCR产物经琼脂糖凝胶电泳后回收,与克隆载体pGEM-T easy连接后,并转化E. coli DH 5α,在含氨苄青霉素的LB平板上选择培养后,挑取白色菌落于LB液体培养基中振荡培养。用此培养物作模板,进行PCR鉴定。将PCR鉴定为阳性的转化单菌落接种于LB（含AMP）培养基中,过夜培养后抽提质粒用EcoR Ⅰ进行酶切鉴定,取阳性克隆进行测序分析。测序结果表明PCR产物（ORF）全长294bp,其中第1-291位是该基因的阅读框架（ORF）,由291bp组成,编码97个氨基酸。经DNAssist V1.02比对分析,所克隆基因与GenBank中收录的鸡ChLptn基因序列（cDNA）的同一性为99.66%,表明成功克隆获得了鸡淋巴细胞趋化因子基因的ORF。DNAssist分析表明,所克隆基因编码的蛋白质分子量为11kDa,等电点为10.9。 以克隆的cDNA序列中的ORF序列为基础,分析pET-32a（+）的酶切图谱,用Premier Primer 5.0设计引物,以E. coli DH 5α（pGEM-T-easy-ChLptn）为模板克隆ChLptn的ORF,与质粒载体pET-32a（+）连接。连接产物转化宿主细菌E. coli BL21（DE3）,再进行PCR和酶切鉴定及测序鉴定。将阳性转化菌落进行IPTG诱导表
其他文献
研究背景对复杂的基因组进行修饰无论对于基础研究还是临床治疗都具有极大吸引力。近几年来,随着人工核酸内切酶技术的不断出现与完善,靶向修饰的梦想逐步变成现实。TALEN就是其中一种,它主要由两部分组成:基于对DNA进行识别的TALE臂和人工改造的核酸内切酶的切割域（FokI）。DNA识别域首先识别并结合到靶位点上,随后切割域FokI形成二聚体,特异性切断靶基因,形成DSB（Double-Strand
骨肉瘤好发于处于骨生长阶段时期的儿童及青少年,由于其高度恶性及高致残率,一旦发现多建议患者手术治疗,但目前临床的上的常规的治疗方案仍为手术切除及放化疗,但手术存在切除不彻底或切除范围过大等缺点。化疗则是针对全身的治疗,缺乏对肿瘤细胞的“针对性”,易引起全身毒性及肿瘤细胞的耐药性。基于纳米材料的光热治疗新型肿瘤微创治疗技术应运而生,即利用合成的纳米材料将近红外激光（NIR）的光能转化成热能,从而使肿
研究背景与目的肺癌约占全部恶性肿瘤死亡率的20%,是目前全球癌症死亡的主要原因,其中超过80%的是非小细胞肺癌（NSCLC）。世界卫生组织（WHO）公布的资料显示：肺癌无论是发病率（120万/年）还是死亡率（110万/年）均居全球癌症首位,并且其发病率和死亡率呈逐年上升趋势。根据我国肿瘤防治办公室公布的资料：从上世纪70年代至今,我国肺癌死亡率上升了近5倍。大量的研究调查显示：吸烟与肺癌的发病密切
研究背景在全球范围内,急性肾损伤（acute kidney injury,AKI）的发病率呈现不断增长趋势,每年约有200万人死于AKI。中国临床研究数据显示,在普通住院患者中AKI的发病率为3.19%,而在ICU其发病率更高达30%。AKI与患者病死率以及慢性肾脏病（chronic kidney disease,CKD）的发生发展密切相关,给个人、社会经济和公共卫生带来了巨大的负担。因此,如何防
研究背景与目的：急性髓系白血病（acute myeloid leukemia, AML）是一类以髓系造血干/祖细胞异常克隆增殖、分化障碍及凋亡受阻为特点的血液系统恶性肿瘤,在细胞遗传学和分子生物学方面具有高度异质性。现代细胞遗传学技术可以检测出大约30%的AML患者伴有重现性遗传学异常,其中t（8;21）（q22;q22）染色体易位是AML患者中常见的一种重现性染色体异常,该易位使21号染色体上的
背景:鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma,NPC）是一种原发于鼻咽部黏膜的上皮组织性恶性肿瘤,发病人群主要为东南亚和非洲,欧洲、美洲、大洋洲和拉丁美洲人较少。中国是世界各大洲鼻咽癌发病率最高的地区之一。鼻咽癌对放射治疗大多中度敏感,放射治疗是鼻咽癌的首选治疗方法。基于国家综合癌症网络（NCCN）指南（版本1.2018）,与单独放疗相比,同步化疗/放疗（每周使用顺铂）可提高生存
研究背景:目前己经发现了很多与肺癌发生相关的危险因素如肺气肿,但很少研究在住院慢性阻塞性肺疾病患者中探索与肺癌相关的临床因素。目的:探讨医院慢阻肺患者肺癌的患病率、组织学类型和与肺癌相关的临床因素。方法:本研究是一项以医院为基础的回顾性横断面研究,纳入2013年07月至2020年07月期间就诊于南方医科大学珠江医院的慢阻肺患者。通过医院病历系统、检验检查结果系统收集患者性别、年龄、吸烟史、出院诊断
背景与目的β-地中海贫血是世界上最常见的单基因遗传病之一。其分子基础是人β-珠蛋白基因（HBB）发生突变所致。到目前为止,在世界上不同种族中已发现200余种β-珠蛋白基因突变。其中,绝大部分是单个碱基替代或者是几个碱基的插入或缺失,仅有少数一部分突变是β-珠蛋白基因的部分或者全部缺失。在中国南方,尤其是在广东省和广西省,β-地中海贫血突变具有很高的人群携带率,β-珠蛋白基因突变类型有将近50种,其
随着人类社会的飞速发展,人类某些中枢神经退行性病变[如帕金森病（Parkinson’s disease, PD）,阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease, AD）等]和中枢神经系统（central nerve system, CNS）损伤[如脑外伤（Traumatic Brain Injury, TBI）,脊髓损伤（Spinal Cord Injury, SCI）)]的发病率也不断增
哺乳动物的乳腺是一个很特殊的器官，雌性动物的乳腺可以在重复的怀孕和生产的多次循环中再生、退化，是动物出生后唯一可以多次重复再生的器官。早在1959年，DeOme等人研究证实，乳腺组织块移植到去除乳腺腺上皮的小鼠乳腺脂肪垫中可以再生小鼠乳腺。1967年Horishino等人进行的系列移植研究表明，乳腺上皮细胞具有自我复制的能力，且可以维持到第七次移植。1998年Kordon等人通过对啮齿类动物乳腺的