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黄曲霉毒素B1(AFB1)是已知毒性最强的真菌毒素,被世界卫生组织癌症机构列为Ⅰ类致癌物,许多国家制定了相应的法律法规限制农产品中AFB1的含量以减少对人和动物的危害。本研究首次将量子点荧光微球作为标记探针应用于竞争免疫层析试纸条实现了对小分子物质的检测,建立了基于FIT/FIC比值定量的AFB1量子点荧光微球免疫层析试纸条定量模型。本研究中所用商品化量子点荧光微球是通过掺杂Cd Se/Zn S量子点所得,直径为247 nm±13 nm,同等摩尔数下量子点荧光微球的荧光强度是量子点的2863倍。以量子点荧光微球为标记探针偶联黄曲霉毒素B1单克隆抗体腹水制备了免疫层析试纸条,试纸条的最佳工艺条件为:样本垫处理液为p H 8.0的硼酸钠缓冲液(含1.0%BSA、0.25%Tween-20和0.1%Na N3),每毫克量子点荧光微球的腹水蛋白质标记量为150μg,荧光微球腹水标记物所用体积为5μL(36μg/m L),T线抗原喷涂浓度为0.4 mg/m L,C线驴抗鼠二抗喷涂浓度为1.0 mg/m L。在此条件下探究了检测样品中p H、甲醇浓度以及试纸条判读时间对试纸条免疫反应动力学的影响。实验结果表明基于FIT/FIC比值进行定量,在一定范围内有效消除了反应时间、溶液p H及甲醇浓度对试纸条反应动力学的影响。本方法所建立的AFB1量子点荧光微球免疫层析试纸条检测模型的线性回归方程为y=-0.28ln(x)+1.25(R2=0.9942),50%抑制浓度(IC50)为13.87±1.54 pg/m L(n=3),其灵敏度比量子点免疫层析试纸条方法学提高了39倍(IC50=0.54±0.06 ng/m L),试纸条定量检测范围为5~60 pg/m L,表明该荧光试纸条具有较好的检测性能。该试纸条与AFG1、AFG2、AFM1、AFB2的交叉反应率(Cr)分别为51.6%、0.2%、1.73%和5.58%,与桔霉素、展青霉素、赭曲霉毒素A、呕吐毒素、玉米赤霉烯酮五种毒素交叉反应率均小于0.01%;试纸条检测实际玉米样品中黄曲霉毒素B1的最低检测限为0.42 pg/m L;试纸条批内检测回收率在97.89%~105.70%之间,批间回收率为96.32%~110.30%,且批内批间检测变异系数(CV)均在10%以内。以上结果表明AFB1量子点荧光微球免疫层析试纸条具有良好的精密度和准确度。同时采用试纸条与ELISA商品试剂盒两种方法随机检测40个玉米阴性加标样本,结果表明二者具有良好的相关性(R2=0.9391)。采用高效液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)方法和试纸条对9份来源不同的谷物及饲料产品进行分析,数据表明两种方法相关性很好。以上结果表明,基于量子点荧光微球标记探针建立的AFB1定量检测方法灵敏度高,可用于实际玉米样品中黄曲霉毒素B1的快速检测,该研究为食品安全检测提供了新的研究思路。