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对于原发性肝癌,手术切除仍是可能获得治愈的主要方法。但即使直径小于5cm的小肝癌,根治性切除后的5年复发率也高达40-50%,肝癌的侵袭和转移是阻碍进一步提高疗效的最大障碍。为深入了解肝癌细胞的这些恶性生物学行为,需要建立相应的模型和方法。复旦大学肝癌研究所曾经建立了人肝癌裸小鼠移植模型(LTNM1-LTNM4)、人肝癌裸大鼠移植模型(LTNR1、LTNR2),高转移人肝癌裸小鼠模型(LCI-D20)、转移性人肝癌细胞系(MHCC97),进行了大量的研究。虽然多数肿瘤起源于遗传学上不稳定的单细胞,但在其演化过程中由于瘤细胞遗传型不稳定加上宿主环境的选择压力,使细胞不断变异,产生分化及表型的多样性,一个实体瘤组织是由生物学性状不同的瘤细胞克隆组成的,这就是肿瘤的异质性。在转移性状方面同样存在肿瘤的异质性,在一个原发性恶性肿瘤细胞群体中,并不是所有瘤细胞均具有侵袭和转移能力,仅某些特殊亚群才具有转移潜能,产生转移表型。在这些具有转移潜能的肿瘤细胞亚群中,它们各自的转移潜能也不一致。MHCC97细胞系也是有一定异质性的细胞群,其中有包括转移力在内的生物学性状不同的细胞亚群。本课题旨在对上述转移性人肝癌细胞系MHCC97进行进一步优化选择,以建立更符合临床和实验研究需要的转移性人肝癌细胞模型系统,为推动深入研究人肝癌转移机理、寻找预测转移的新指标、筛选防治新策略奠定工作基础。第一部分不同肺转移潜能的人肝癌克隆细胞株的分离和建立本部分工作的主要目的是从高转移性人肝癌细胞系MHCC97中分离出不同转移潜能的单克隆细胞株,并对其相关的细胞生物学特性进行初步研究。利用MHCC97细胞第25代传代细胞进行下列实验。首先对细胞进行同步化培养,继而采用有限稀释法从其中分离出单个细胞,在体外进行单克隆细胞培养。为促进单个细胞生长,采用条件培养液和饲细胞技术。待每个细胞独立生长成细胞株后,在裸鼠体内进行初步筛选。在形成的28个单细胞克隆株中,通过裸鼠体内接种鉴定,初筛出转移力差别最大的两个