叠鞘石斛中联苄类化合物的制备工艺及其抗氧化作用研究

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石斛为传统名贵中药,具有养阴清热,益胃生津的功效,在临床上及中药复方被广泛使用。其主要含有生物碱类、联苄类、菲类、氨基酸类、倍半萜类、多糖类等化学成分。联苄类具有抗肿瘤、抗氧化、抗血管新生、抑制NO生成等多样的生物活性,为石斛的活性成分之一。查阅文献尚未有关于联苄类化合物提取和纯化工艺的研究报道,故本课题确定以叠鞘石斛中联苄类化合物为研究对象,对其含量测定、提取工艺、分离纯化、抗氧化作用进行系统研究,以期为进一步开发抗氧化活性新制剂奠定基础。研究内容和结果如下:首先,建立联苄类化合物的含量测定方法。以石斛酚为对照品,采用紫外-可见分光光度法和HPLC测定联苄类化合物的总量和石斛酚的含量。绘制联苄类化合物和石斛酚的标准曲线,其回归方程分别为A=0.0153C+0.0054, r=0.9999; Y=813.17X+13.084, r=0.9998,确立定量检测方法。其次,对叠鞘石斛中联苄类化合物的提取工艺进行研究。以联苄类化合物的提取率、石斛酚的提取率为指标,对叠鞘石斛中联苄类化合物的回流提取工艺进行单因素考察。在单因素试验基础上,进行主要因素设计L9(34)正交试验,确定最佳提取条件:乙醇浓度70%,料液比1g:12ml,每次提取2h,提取3次。再次,对联苄类化合物的提物进行分离纯化工艺研究。以静态饱和吸附率、解吸率为指标,通过静态吸附-解吸试验,对X-5、HPD-300、D-101、AB-8、S-8型五种大孔树脂进行筛选。选定HPD-300型大孔树脂用于联苄类化合物的分离纯化。对吸附性能和解吸性能进行考察,确定最佳纯化工艺:上样浓度0.4g(生药材)/ml,上样流速0.5ml/min,上样量3BV,用水和70%乙醇各10BV以1.0ml/min的流速洗脱,收集70%乙醇洗脱部位。纯化后联苄类化合物纯度达67.07%,较纯化前提高了4.25倍;纯化后石斛酚纯度达0.224%,较纯化前提高了4.92倍。最后,以Vc为对照,通过清除AAPH·、清除DPPH·、抑制·OH、清除O2-·的能力测定,比较研究了叠鞘石斛生药液、联苄类化合物提取液、联苄类化合物纯化液的体外抗氧化活性。结果表明,纯化后联苄类化合物抗氧化能力有所提高。本研究对联苄类化合物的总量测定方法和叠鞘石斛中联苄类化合物的提取纯化工艺进行了系统深入研究。纯化后联苄类化合物的活性增强,且通过抗氧化能力测定实验表明其具有较好的抗氧化能力,可以作为一种天然抗氧化剂和新剂型加以开发,具有一定的实用意义和理论价值。
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