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背景和目的:
准分子激光被广泛地用于治疗屈光不正和角膜表面混浊。近年来激光技术、手术技巧和药物治疗的发展提高了PRK的治疗效果。PRK和LASEK所进行的表面切削不仅避免了与角膜瓣相关的并发症,减少了术后角膜扩张症的风险,同时PRK或LASEK联合波前像差引导的个体化切削可以提供更好的视觉质量。角膜上皮下混浊(Haze)仍是准分子激光角膜切削术后常见的并发症之一。许多研究者在临床工作中发现,丝裂霉素C能抑制PRK或LASEK术后损伤愈合反应,预防和治疗角膜上皮下混浊,减轻屈光回退,没有出现与丝裂霉素C相关的不良反应。先前对丝裂霉素C治疗PRK术后Haze的研究主要为临床病例观察和实验标本光镜和电镜下的形态学研究。本实验利用兔PRK模型,观察PRK术后角膜损伤愈合的病理生理过程,通过TUNEL和免疫组织化学的方法对PRK术后基质细胞凋亡,增殖和转化进行研究,探讨丝裂霉素C对PRK术后角膜损伤愈合影响,及其治疗角膜上皮下混浊和屈光回退的机制。
方法:
对24只新西兰白兔行-9.0DPRK手术,左眼为对照组,右眼为MMC处理组。MMC处理组在切削后用含0.02%MMC的甲基纤维素海绵覆盖创面2分钟。术后裂隙灯显微镜检查各组角膜上皮愈合情况,进行Haze分级。术后4周超声角膜实质测厚评价屈光回退程度。分别于术后24小时、72小时、7天和28天处死6只动物,取下角膜标本。利用HE染色观察角膜上皮的损伤愈合及炎症细胞浸润,TUNEL染色观察角膜基质细胞凋亡,免疫组织化学方法观察PRK术后角膜PCNA,α-SMA和。TGF-β1表达。
结果:
1.临床观察结果两组角膜上皮均于术后3天完全愈合,统计学分析无显著差异(P>0.05)。
秩和检验分析,MMC组角膜Haze轻于对照组(P<0.025)。超声角膜实质测厚提示MMC组术后4周角膜厚度变化大于对照组(P<0.01)。 2.HE染色结果术后1天,MMC组基质层炎症细胞浸润数与对照组无显著差异(P=0.588)。术后3天,MMC组基质层炎症细胞浸润数显著少于对照组(P<0.01)。对照组术后1天与术后3天相比基质层炎症细胞浸润数无显著差异(P=0.288)。
3.免疫组织化学染色结果术后24小时和术后72小时,MMC组与对照组相比基质细胞凋亡数均无显著差异(2个时间点均有P>0.05)。对照组术后72小时与术后24小时相比基质细胞凋亡数显著减少(P<0.05)。PRK术后72小时和术后7天,MMC组增殖的基质细胞数均显著少于对照组(2个时间点均有P<0.01)。对照组术后7天与术后72小时相比增殖的基质细胞数显著增多(P<0.01)。术后28天,对照组角膜基质浅层中出现α-SMA(+)细胞:MMC处理组角膜基质层中α-SMA染色阴性。术后28天,对照组上皮及基质浅层TGF-β1染色阳性,MMC处理组上皮及基质层TGF-β1染色阴性。
结论:
丝裂霉素C通过抑制上皮细胞增生,减少角膜基质层炎症细胞浸润,抑制角膜基质细胞增殖、转化和TGF-β1表达,减轻PRK术后损伤愈合反应,抑制Haze形成和屈光回退,对上皮愈合时间和基质细胞凋亡无明显影响。PRK术中合理应用MMC可以有效的预防Haze的形成。