【摘 要】
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目的:了解长春地区儿童细菌性腹泻的病原菌类型、病原学特征和抗生素耐药模式。在中药苍术及联合应用抗生素治疗儿童细菌感染性腹泻临床疗效评估的基础上,以重要耐药病原菌为研究对象,深入开展中药苍术缓解抗生素耐药及耐药菌敏化的机制研究,系统阐述中药苍术作用下耐药性的消除机理和增加耐药菌敏化的分子网络机制,为减少抗生素的临床应用提供技术支持。方法:采集2019年4月至7月长春市儿童医院和长春中医药大学附属医院
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目的:了解长春地区儿童细菌性腹泻的病原菌类型、病原学特征和抗生素耐药模式。在中药苍术及联合应用抗生素治疗儿童细菌感染性腹泻临床疗效评估的基础上,以重要耐药病原菌为研究对象,深入开展中药苍术缓解抗生素耐药及耐药菌敏化的机制研究,系统阐述中药苍术作用下耐药性的消除机理和增加耐药菌敏化的分子网络机制,为减少抗生素的临床应用提供技术支持。方法:采集2019年4月至7月长春市儿童医院和长春中医药大学附属医院儿童腹泻样品50份,进行16S r DNA扩增子高通量测序分析并分离鉴定大肠埃希氏菌分离株;E-test法测定细菌的耐药谱与抗生素最小抑菌浓度;ERIC-PCR检测细菌的同源性,测定13种毒力基因,进行系统分群和血清型鉴定;对典型碳青霉烯耐药大肠埃希氏菌菌株进行全基因组测序;对小鼠进行最低致死量实验观测病菌毒力强弱;实验通过水蒸气蒸馏法获得苍术挥发油,煎煮苍术饮片获得苍术水煎剂;肉汤法测定苍术水煎剂、苍术颗粒剂和苍术素单体对典型碳青霉烯耐药大肠埃希氏菌菌株的最小抑菌浓度;药敏片法测定苍术挥发油的抑菌作用;利用中药单体苍术素对耐药菌进行质粒消除,比较质粒消除前后耐药菌的生化指标及耐药谱变化。结果:通过16S r DNA扩增子组学测序分析,排除沙门氏菌和志贺氏菌等感染的可能,确定优势病原菌为大肠埃希氏菌。分离共获得110株大肠埃希氏菌,A群、B2群和D群是系统进化分群主要分群类型;检测到O抗原血清型23种,其中优势血清型为O119;检出13株大肠埃希氏菌携带毒力相关基因EAST1,7株携带eae基因,其中1株同时携带EAST1基因和eae基因。110株大肠埃希氏菌分离株对21种抗生素的耐药率在4.3%-68.1%之间,多药耐药菌菌株比例高达63.8%,49.3%的菌株为ESBL表型,喹诺酮类抗生素的耐药率约为50%,阿米卡星的耐药率为5.8%、碳青霉烯类抗生素耐药率为4.3%。低浓度的菌液腹腔注射入小鼠体内即可导致小鼠的死亡,表明从临床腹泻儿童粪便样品分离获得的菌株的毒力较强。苍术颗粒剂和苍术水煎剂在可配制最大浓度范围内对耐药菌未产生明显抑菌作用,苍术挥发油具有一定的抑菌作用,苍术素对耐药病原菌的最小抑菌浓度是25 mg/m L。苍术素对多药耐药菌株进行质粒消除实验并获得质粒消除菌株,质粒消除前后耐药菌的生化指标及耐药谱具有较大变化。结论:本研究所采取的长春地区儿童腹泻样本,从中分离得到的致泻性大肠埃希氏菌,是导致长春地区儿童腹泻的重要病原菌之一,非典型肠致病性大肠埃希氏菌和肠集聚性大肠埃希氏菌是较为流行的。目前临床常用的β-内酰胺类和喹诺酮类抗生素已不能达到良好的治疗效果,ESBLs菌株对12种抗生素表现为较高的耐药水平,儿童感染性腹泻大肠埃希氏菌的耐药形势严峻,应进一步加强耐药性监测与抗生素应用管理。通过肉汤法及纸片法对MIC的测定,证明苍术挥发油和单体苍术素对耐药菌具有一定的抑菌作用,苍术水煎剂和苍术颗粒剂抑菌作用不明显。苍术素可有效消除碳青霉烯耐药大肠埃希氏菌菌株的耐药质粒,此结果为苍术缓解抗生素耐药及消除病原菌耐药性的机制研究提供了研究思路,具有深远而重要的意义。
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