【摘 要】
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目的:本研究旨在探讨黑色素瘤外泌体（Melanoma exosomes,MM-ex）携带的Prox-1蛋白在调控淋巴管内皮细胞（Lymphatic endothelial cells,LECs）增殖、迁移以及生成具有转移肿瘤细胞功能淋巴管过程中的作用。方法:研究内容主要分为两部分进行:1.采用细胞实验研究黑色素瘤细胞来源的外泌体(MM-ex/MM-exshProx-1)通过Prox-1蛋白调控淋巴
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目的:本研究旨在探讨黑色素瘤外泌体（Melanoma exosomes,MM-ex）携带的Prox-1蛋白在调控淋巴管内皮细胞（Lymphatic endothelial cells,LECs）增殖、迁移以及生成具有转移肿瘤细胞功能淋巴管过程中的作用。方法:研究内容主要分为两部分进行:1.采用细胞实验研究黑色素瘤细胞来源的外泌体(MM-ex/MM-exshProx-1)通过Prox-1蛋白调控淋巴管内皮细胞（LECs）的增殖、迁移及毛细管形成机制的研究。采用慢病毒转染实验构建低表达Prox-1黑色素瘤细胞株(MMShProx-1)。采用试剂盒法提取MM及MMShProx-1外泌体。采用免疫荧光检测、Western blot检测、细胞增殖及细胞迁移实验,观察黑色素瘤细胞外泌体及MMShProx-1外泌体对LECs生物学特性的影响;2.采用临床研究证实黑色素瘤中Prox-1的表达与肿瘤淋巴管再生之间的相关性。采用免疫组化（IHC）法检测2014年09月至2021年04月在江苏省镇江市江苏大学附属医院收治的32例黑色素瘤患者的病理切片,探索患者病灶及周围组织中Prox-1、淋巴管内皮透明质酸受体-1（Lymphatic vessel endothelial hyaluronan-receptor-1,LYVE-1）的表达情况,以微淋巴管密度（Microlymphatic vessel density,MLVD）表示LYVE-1的显色情况。运用统计学分析此类患者的临床数据,以进一步探究Prox-1在肿瘤中的表达情况是否影响患者的生存率及预后情况。实验结果:1.在细胞实验中:MM-ex上调淋巴管标记物VRGFR-3的表达,使LECs的增殖及迁移能力加强。而MM-exshProx-1,对LECs增殖及迁移未见明显影响。MM-ex可通过Prox-1蛋白促进组织间新生淋巴管的形成。2.在临床实验中:Prox-1蛋白在黑色素瘤淋巴结转移组和肿瘤晚期的表达率[87.50%（14/16）,79.17%（19/24）]明显高于无淋巴结转移组和肿瘤早期组[37.50%（6/16）,12.50%（1/8）]（均P（27）0.05）。LYVE-1在黑色素瘤转移组和癌症晚期组的表达[（9.30±4.65）,（5.15±1.72）]明显高于无淋巴结转移组和癌症早期组组[（5.66±1.69）,（5.30±1.65）]（均P（27）0.05）。且Prox-1与LYVE-1的表达呈正相关（r=0.470,p=0.007）结论:结果表明黑色素瘤细胞外泌体可通过Prox-1蛋白通路调控肿瘤的淋巴管转移。实验确定肿瘤病理切片中高表达Prox-1蛋白可作为黑色素瘤进展和转移的生物标志物。与肿瘤的预后相关。并验证了黑色素瘤外泌体Prox-1蛋白的治疗可作为人类黑色素瘤治疗的一个前导信号。
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