【摘 要】
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植物生长受到多种非生物因素的影响,如低温、高温、干旱和盐胁迫等,严重影响了农作物的产量,给农业带来了巨大的损失。近几年,关于超氧化物歧化酶、抗坏血酸过氧化物酶、过氧
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植物生长受到多种非生物因素的影响,如低温、高温、干旱和盐胁迫等,严重影响了农作物的产量,给农业带来了巨大的损失。近几年,关于超氧化物歧化酶、抗坏血酸过氧化物酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶和谷胱甘肽还原酶等抗氧化酶基因的研究越来越多。油菜(Brassica campestris L.)是中国重要的油料作物之一。冬油菜新品种陇油6号是选育的超强抗寒性品种,是目前唯一能够在甘肃中北部与河西地区安全越冬的冬油菜品种。本研究以白菜型油菜陇油6号和天油2号为供试材料,对油菜谷胱甘肽还原酶同工酶基因GR2的序列特征以及功能做了初步研究,并利用实时荧光定量PCR技术分析在不同胁迫处理下GR2基因以及五种抗氧化酶基因(GR1、SOD、CAT、APX和GPX)的表达情况,为深入研究植物的抗氧化系统提供一定的理论依据。1.从陇油6号油菜中克隆得到一个新的油菜GR2基因,序列全长为2073 bp,包括1692 bp开放阅读框,该基因编码563个氨基酸的蛋白质,预测蛋白质分子量为60.7 kD,理论等电点7.9。高级结构分析表明GR2预测蛋白属于亲水性蛋白,有1-3个跨膜区,没有信号肽序列,无规则卷曲占主导。综合氨基酸同源性分析、系统进化树结果以及定位软件预测,发现油菜GR2基因与多种植物GR有较高的同源性,与芥菜Bj GR2同源性最高,比对油菜GR1和GR2发现它们同源性较低,且油菜GR2属于叶绿体GR。2.不同组织的实时荧光定量PCR结果表明,GR2基因在两种油菜根、茎和叶中都有表达,但其表达量在不同组织存在差异,叶中表达量最高。3.不同处理下抗氧化酶基因的定量结果显示:低温、高温、干旱和盐胁迫均能诱导油菜两种谷胱甘肽还原酶基因GR1和GR2的表达,但诱导程度不同。在不同逆境处理后GR1基因在陇油6号中表达量较高,而GR2基因在天油2号中表达量较高;ABA预处理再逆境处理使得GR1和GR2表达量都明显升高,这种升高的趋势在陇油6号中更显著;H2O2预处理再逆境处理增加了GR1基因的表达,但降低了GR2基因的表达。Cu/Zn-SOD、CAT、cAPX和GPX基因的表达均受上述逆境胁迫因子的诱导,表达程度在不同胁迫下有所不同;ABA预处理增加了抗氧化酶基因在逆境处理和非逆境处理下的的表达,但升高趋势并不一致;H2O2单独处理能诱导各种抗氧化酶基因的表达,但H2O2预处理后再逆境处理增加了Cu/Zn-SOD、cAPX和GPX基因的表达却降低了CAT基因的表达量。MAPKK专一性抑制剂U0126预处理均能抑制正常生长和逆境处理条件下各种抗氧化酶基因的表达。上述结果表明低温、高温、干旱和盐胁迫均能诱导抗氧化酶基因的表达,且ABA、H2O2和MAPK级联途径信参与调控植物抗逆过程。
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