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目的构建针对人类生长因子受体结合蛋白2相关的接头蛋白1（Grb2-AssociatedBinder1，Gab1）基因的慢病毒干扰载体，从转录后水平抑制Gab1基因的表达，并将构建的慢病毒RNA干扰载体载染人血管内皮细胞，研究沉默细胞内Gab1基因表达后对细胞增殖能力的影响。方法针对人类Gab1基因设计5个靶点的SiRNA序列，并分别合成靶序列的Oligo DNA，退火形成双链DNA，与经Hpa I和Xho I限制性内切酶双酶切后的GV118载体连接，产生Gab1‐RNAi重组质粒，PCR筛选阳性克隆并进行测序鉴定。将各个靶点的重组质粒与构建的Gab1过表达质粒共转染293T细胞，通过Western‐bolt检测Gab1蛋白表达水平来筛迁最佳干扰靶点的重组质粒，再将最佳的Gab1‐RNAi重组质粒、pHelper1.0和pHelper2.0质粒共转染239T细胞，包装产生LV‐Gab1‐RNAi慢病毒并测定其滴度。并将获得的慢病毒分别载染EA.hy926细胞，通过荧光显微镜观察GFP的表达情况，测定其转染效率；通过RT‐PCR和Western‐bolt检测转染后的EA.hy926细胞中Gab1mRNA和蛋白表达水平来验证慢病毒干扰载体的基因沉默效率。将构建好的慢病毒干扰载体载染EA.hy926细胞，在细胞接种后第1、2、3、4、5d利用MTT分析方法检测其对细胞增殖的影响。结果1、筛选阳性克隆经ＰＣＲ及测序鉴定，成功将Gab1靶向含shRNA的双链DNA序列插入GV118载体中即Gab1‐RNAi重组质粒构建成功。2、包装产生的LV‐Gab1‐RNAi慢病毒载染293T细胞，测定的滴度为3×109TU/ml。3、RT-PCR和Western Blot检测RNAi慢病毒载染后的血管内皮细胞中目的基因表达水平，证实构建的慢病毒干扰载体可以高效抑制Gab1基因的表达。4、沉默血管内皮细胞中Gab1基因表达后，细胞增殖受到明显的抑制。结论构建的特异RNAi慢病毒能够高效载染血管内皮细胞，并且细胞内Gab1目的基因mRNA和蛋白的表达水平显著降低，可为研究基因沉默前后血管内皮细胞生物学行为的改变和探讨Gab1基因在血管新生中的作用提供有效技术手段；Gab1基因在促进细胞增殖方面有重要作用。