【摘 要】
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目的研究几丁聚糖对体外培养的人脐静脉内皮细胞生长的影响及相关基因表达的影响,以寻求一种新型支架涂层物。方法采用体外培养的人脐静脉内皮细胞株,用不同质量浓度的几丁聚
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目的研究几丁聚糖对体外培养的人脐静脉内皮细胞生长的影响及相关基因表达的影响,以寻求一种新型支架涂层物。方法采用体外培养的人脐静脉内皮细胞株,用不同质量浓度的几丁聚糖条件培养液培养,实验分组如下:几丁聚糖组①Chi:0mg/ml,乙酸溶媒对照(ethanoic acid control )②Chi:0.01mg/ml③Chi:0.1mg/ml④Chi:1mg/ml。作用48h后行相关检查。以四唑盐比色法(MTT)测细胞活性;用流式细胞术(FCM)测定内皮细胞凋亡率;用吖啶橙荧光染色(AO染色)观察细胞凋亡形态;免疫细胞化学(IHC)测Bcl-2和Bax蛋白的表达;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Bcl-2和BaxmRNA的表达。结果⑴人脐静脉内皮细胞孵育48小时后,MTT法检测随着几丁聚糖质量浓度(Chi :0.01mg/ml～1 mg/ml)的增加,各组吸光度(A值)增高(p<0.05和p<0.01),与此对应内皮细胞代谢活性增加。(2)流式细胞仪结果显示:几丁聚糖孵育内皮细胞48h后,随着其浓度(Chi :0.01mg/ml～1 mg/ml)的增加,HUVECs细胞凋亡率下降,在Chi:0mg/ml组细胞凋亡明显(38.1±3.3%),细胞荧光染色出现核浓缩、碎裂等凋亡特征,而几丁聚糖(0.01、0.1、1mg/ml)依次降低凋亡率到23.53±3.77%、20.01±2.70%、9.7±3.1% ,与Chi:0mg/ml组相比,几丁聚糖预处理组数据有显著差异(P<0.01)。(3)同时免疫细胞化学测检测到,随着几丁聚糖质量浓度(Chi :0.01mg/ml～1 mg/ml)的增加,能显著性增强Bcl-2蛋白的表达和减弱Bax蛋白表达。(4)逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测,随着几丁聚糖质量浓度(Chi :0.01mg/ml～1 mg/ml)的增加,能显著性增强Bcl-2 mRNA的表达和减弱Bax mRNA表达。结论一定浓度的几丁聚糖可以增加人脐静脉内皮细胞Bcl-2基因的表达产物,同时降低Bax基因的表达产物,降低凋亡率,并可增加内皮细胞代谢活性。
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