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目的:检测沉默白细胞介素-4受体(Interleukin-4 receptor,IL-4R)基因对肝癌细胞系HepG2生物学行为的影响及潜在的作用机制。方法:1.用含IL-4的培养基体外培养HepG2细胞,设计并合成针对IL-4R基因的特异性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)及空载siRNA,设置Normal组、Control siRNA组及IL-4R siRNA1、IL-4R siRNA2、IL-4R siRNA3转染组,利用阳离子脂质体法进行瞬时转染。2.实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)和免疫蛋白印迹(Western blot)法分别检测转染24h和72h后,各组细胞中IL-4R在mRNA和蛋白水平中的变化,并以此筛选出干扰效果最佳的IL-4R siRNA序列用于后续实验。3.CCK8法、Transwell法用于检测沉默IL-4R基因后对HepG2细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响。4.通过流式细胞学的方法检测下调HepG2细胞中IL-4R的表达对细胞凋亡和细胞周期的影响。5.运用Western blot法检测沉默IL-4R后,HepG2细胞中金属蛋白酶2(MMP2)、金属蛋白酶9(MMP9)及抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,以及JAK1/STAT6、PI3K/AKT/mTOR、MAPK三条信号通路中各相关蛋白的表达。结果:1.qRT-PCR和Western blot检测显示IL-4R siRNA1组、IL-4R siRNA2组和IL-4R siRNA3组细胞中IL-4R的mRNA和蛋白水平均低于Normal组和Control siRNA组,且IL-4R siRNA3组下调最明显。2.CCK8法显示,沉默IL-4R可以使IL-4R siRNA3组中HepG2细胞的增殖能力较Normal组和Control siRNA组明显下降。3.Transwell法显示,IL-4R siRNA3组中HepG2细胞的侵袭和迁移能力较Normal组和Control siRNA组显著受到抑制。4.流式细胞学检测显示,与Normal组和Control siRNA组相比,干扰HepG2细胞中IL-4R基因的表达可以促进细胞的早期凋亡,而不影响细胞周期的分布。5.Western blot检测结果显示,IL-4R siRNA3组中MMP2和Bcl-2的表达较Normal组和Control siRNA组显著下降,但MMP9蛋白的表达无明显变化。6.Western blot检测结果显示,与Normal组和Control siRNA组相比,IL-4R siRNA3组细胞中p-JAK1及p-STAT6蛋白的表达显著下降,PI3K、AKT、mTOR及JNK蛋白的磷酸化也受到明显抑制,但p-ERK1/2和p-P38蛋白表达的变化无统计学意义。结论:1.IL-4R引起的信号传导不仅可以促进HepG2细胞的增殖、侵袭和迁移,还可以抑制细胞凋亡,且对HepG2细胞迁移、侵袭和凋亡的影响至少部分归结于细胞中MMP2和Bcl-2蛋白表达的变化。2.JAK1/STAT6、PI3K/AKT/mTOR和JNK信号通路可能共同参与IL-4R对HepG2细胞生物学行为的影响。