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内毒素血症是由于革兰氏阴性细菌的细胞壁释放出大量内毒素(LPS)至血液,或输入大量内毒素污染的液体而引起。内毒素血症能引起机体的多种器官功能障碍和损伤,膈肌作为呼吸系统的重要组织,受到内毒素的影响较大。内毒素血症时,大量生成的自由基,引起线粒体功能障碍,对内毒素诱导细胞损害和膈肌损伤起关键作用。机体的组织细胞会发生脂质过氧化作用,其抗氧化防御功能也会发生相应的变化。
大量研究证实褪黑素(MT)和氨基胍(AG)是有效的抗氧化药物,本实验将72只体重为9.99kg±1.23kg健康山羊随机分成生理盐水组、内毒素组(LPS组)、褪黑素组(MT组)、褪黑素保护组(LPS+MT组)、氨基胍组(AG组)、氨基胍保护组(LPS+AG组),每组12只,其中每组又分成静脉注射药物后3h测定与6h测定2个小组。各组山羊在麻醉后立即剖杀取膈肌,取一部分膈肌提取膈肌线粒体,测定线粒体总抗氧化能力(T—AOC)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的活性、ATP酶活性。从而揭示内毒素血症对膈肌的影响,并探求MT和AG对内毒素血症山羊膈肌线粒体的保护作用机理,最终为反刍动物内毒素血症的防治提供理论基础。
结果表明:
1、山羊发生内毒素血症时,LPS组与生理盐水组相比较,膈肌线粒体的SOD、T—AOC、CAT在3h、6h均显著降低(P<0.05),MDA浓度明显升高(P<0.05),应用MT和AG进行保护后,由LPS引起的线粒体功能障碍得到了缓解。与内毒素组比,T—AOC、CAT和SOD的活性增强,MDA的生成减少。提示山羊注射LPS后,膈肌线粒体的抗氧化功能降低;MT和AG可以提高线粒体的抗氧化功能。
2、山羊发生内毒素血症时,LPS组与生理盐水组相比较,膈肌线粒体复合体Ⅰ、Ⅱ和Ⅳ的活性在3h与6h这两个时间点均显著降低(P<0.05)。线粒体复合体Ⅲ活性这两个时间点均降低,但差异不显著(P>0.05)。提示山羊注射LPS后,主要引起膈肌线粒体复合体Ⅰ、Ⅱ和Ⅳ的活性降低,线粒体的功能发生紊乱。应用MT和AG进行保护后,复合体Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ的活性在3h、6h显著升高(P<0.05),尤其复合体Ⅲ和Ⅳ的活性达到生理盐水组水平(P<0.05);MT组和AG组复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ在3h、6h高于生理盐水组,但差异不显著(P>0.05);提示MT和AG对山羊膈肌线粒体复合体功能具有保护作用功能,主要作用于复合体Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ。
3、山羊发生内毒素血症时,LPS组与生理盐水组相比较,膈肌线粒体在3h与6h这两个时间点复合体Na+K+—ATP酶、Ca2+Mg2+—ATP酶的活性均显著降低(P<0.05)。提示LPS可使膈肌线粒体Na+K+—ATP酶和Ca2+Mg2+—ATP酶的活性降低。应用MT和AG进行保护后,Ca2+Mg2+—ATP酶的活性在3h、6h显著升高(P<0.05),但低于生理盐水组水平(P<0.05);MT组和AG组高于生理盐水组,但差异不显著(P>0.05);提示MT和AG对山羊膈肌线粒体ATP酶活性具有保护作用功能,并且主要作用于Ca2+Mg2+—ATP酶。
4、就应用MT3h和6h两组的结果比较,3h组各指标普遍高于6h组;而AG3h和6h两组的结果比较,6h组各指标普遍都高于3h组;MT+LPS组的膈肌线粒体3h组的SOD、复合体Ⅳ、Na+K+—ATP酶活性明显高于AG+LPS组(P<0.05);AG+LPS的膈肌线粒体6h组的复合体Ⅱ、Ⅳ和Ca2+Mg2+—ATP酶活性明显高于MT+LPS组(P<0.05);AG组的膈肌线粒体6h组的ATP生成量明显高于MT组(P<0.05)。提示山羊静注MT的药效短,6h开始衰减;而AG的药效随时间而增强。