【摘 要】
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MKRN2是一种E3泛素连接酶,MKRN2在神经系统肿瘤中的生物学作用尚不清楚,本文研究的目的是探索MKRN2调控神经系统肿瘤的分子机制。本文设计了靶向MKRN2的sh RNA,并在人神经母细胞瘤SHSY5Y细胞中建立敲低MKRN2的稳转细胞系。细胞增殖实验、细胞克隆形成、划痕试验结果表明敲低MKRN2可以促进SHSY5Y细胞的增殖和迁移。本文进行了一系列实验:蛋白相互作用质谱分析、免疫共沉淀、G
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MKRN2是一种E3泛素连接酶,MKRN2在神经系统肿瘤中的生物学作用尚不清楚,本文研究的目的是探索MKRN2调控神经系统肿瘤的分子机制。本文设计了靶向MKRN2的sh RNA,并在人神经母细胞瘤SHSY5Y细胞中建立敲低MKRN2的稳转细胞系。细胞增殖实验、细胞克隆形成、划痕试验结果表明敲低MKRN2可以促进SHSY5Y细胞的增殖和迁移。本文进行了一系列实验:蛋白相互作用质谱分析、免疫共沉淀、GST-Pulldown和免疫荧光,鉴定了IGF2BP3是MKRN2新的相互作用蛋白,并通过体内泛素化、内源性泛素化、在细菌中重构泛素化系统和质谱系统分析翻译后修饰位点等,将IGF2BP3鉴定为MKRN2新的泛素化底物。IGF2BP3是一种RNA结合蛋白,可调节包括PDPN、CD44、CD164在内的许多m RNA的稳定性,通过实时荧光定量PCR和荧光素酶报告基因实验,表明MKRN2以IGF2BP3依赖的方式调节CD44、PDPN、CD164的表达。这些结果表明,MKRN2可能是治疗神经系统肿瘤的潜在靶标。
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