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研究背景及目的越来越多的研究显示糖尿病及其并发症与氧化应激之间有紧密的联系。糖尿病慢性并发症发病的统一机制学说认为：多元醇通路激活、蛋白质非酶糖化增加、蛋白激酶C激活、己糖胺途径激活等4条引起糖尿病各并发症的共同通路实质上都是高糖诱导的超氧化物过表达的结果。糖尿病肝损害是指糖尿病引起的肝脏功能和组织学变化的病变,属于糖尿病慢性并发症范畴。氧化应激与脂质过氧化增强时,不仅可以直接损伤肝细胞、诱导炎症细胞对脂质的趋化产生炎症浸润,还能激活肝贮脂细胞(星形细胞)促进胶原纤维合成,导致纤维化甚至肝硬化。抗氧化剂可减少自由基的产生或直接淬灭机体产生的自由基,增强机体的抗氧化能力。因此,采用抗氧化剂治疗糖尿病以改善机体异常的病理生理状况,成为现今治疗糖尿病及其并发症的重要方法之一。多种抗氧化剂如维生素C、E和α-硫辛酸等可对糖尿病并发症产生有益的影响。通络方剂(Tongluo Recipe, TLR)是中药复方制剂,由人参、水蛭、蜈蚣、全蝎、土鳖虫和赤芍等组成。现代药理研究表明,人参的主要活性成分人参皂甙具有降血脂,抗氧化,抗凋亡作用；水蛭有利尿、消除尿蛋白的作用,并能改善微循环；土鳖虫和全蝎具有抗凝、抗血栓形成的作用；赤芍具有降低全血浓度、抑制血小板聚集,降低血小板动附性,降低纤维蛋白原,限制血栓形成时间等作用。本课题前期研究表明通络方剂能通过其抗氧化和改善血流动力学等作用减轻糖尿病大鼠并发的肾脏、血管内皮、心肌细胞、脑海马组织等的损伤。通络方剂是否对糖尿病肝损害具有治疗作用,目前尚无相关报道。本实验使用链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)制备糖尿病大鼠模型,观察其对实验性糖尿病鼠血清肝功能、肝纤维化相关指标,肝组织氧化应激及肝脏形态学改变的影响,旨在探讨通络方剂对糖尿病肝损害的疗效及其可能机制。研究对象及方法以SD大鼠为研究对象,予链脲佐菌素60 mg／kg一次性腹腔注射,1周后测血糖≥16.7mol／L为糖尿病模型制备成功。将糖尿病模型鼠以随机数字表法分为4组(每组10只)：(1)糖尿病对照组(DM)；(2)通络方剂小剂量组[TL,TLR剂量为0.5g／(kg·d)]；(3)通络方剂中等剂量组[TM,TLR剂量为1.0g／(kg·d)]；(4)通络方剂大剂量组[TH,TLR剂量为2.0g／(kg·d)]。同时取10只大鼠作为正常对照组(CN)。实验周期为12周。1.检测各组大鼠体质量、血糖、血脂[甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)]2.检测血清肝功能指标[丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(AKP)],血清肝纤维化指标[透明质酸(HA)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-c)、层粘连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)]3.光镜及透射电镜观察肝组织形态学改变。4.检测肝组织氧化应激相关指标[超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)丙二醛(MDA)]结果：1.糖尿病大鼠血糖及血清三酰甘油显著升高(P＜0.01),体质量和血清高密度脂蛋白显著降低(P＜0.01)。经通络方剂治疗12周后,中高剂量组糖尿病大鼠体质量较未治疗鼠有所增加,但没有统计学意义；糖尿病大鼠的血糖、血脂指标在通络方剂治疗后未见到明显改变。2.糖尿病大鼠并发肝脏损伤,血清肝功能指标ALT、AST及AKP水平均显著升高(P<0.01)。经通络方剂治疗12周后,中高剂量组糖尿病大鼠血清ALT、AST水平明显下降(P<0.05),肝损伤得到一定程度的改善。3.糖尿病大鼠血清肝纤维化指标HA及Ⅳ-c水平显著升高(P<0.01)。经通络方剂治疗12周后,高剂量组糖尿病大鼠血清肝纤维化指标HA及Ⅳ-c水平明显下降(P<0.05)。4.光镜及透射电镜观察发现,糖尿病大鼠肝细胞出现明显的糖尿病特征性病理变化：胞质糖原颗粒明显增多,胞质内脂滴增多,肝细胞线粒体嵴模糊且基质变密,粗面内质网局部脱颗粒、滑面内质网扩大。同时,糖尿病大鼠出现肝脏纤维化和微血管损伤的病理变化：肝血窦边缘及肝汇管区胶原纤维增生,汇管区血管内皮细胞线粒体肿胀、嵴缺失,部分血管壁增厚,Disse间隙肝贮脂细胞增生。经通络方剂干预12周后,糖尿病大鼠肝细胞胞质糖原颗粒明显减少,线粒体嵴变清晰且基质密度降低,粗面及滑面内质网形态接近正常。糖尿病大鼠肝血窦边缘及肝汇管区胶原纤维增生减轻,汇管区血管内皮细胞形态及血管壁厚度接近正常,Disse间隙肝贮脂细胞增生减轻。通络方剂治疗使上述病理形态得到明显改善。5.糖尿病大鼠肝组织抗氧化酶SOD、CAT活性均显著降低(P<0.01)；GSH-Px水平也有所下降,但差异没有统计学意义；MDA水平显著升高(P<0.01),肝组织处于过度氧化应激状态。经通络方剂治疗12周后,低中高剂量组糖尿病大鼠肝组织SOD活性均显著增加(P＜0.01)；中高剂量组糖尿病大鼠肝组织MDA水平显著下降(P<0.01),肝组织的氧化应激水平有所下降。结论：1.糖尿病大鼠血清肝功能及肝纤维化指标升高,同时出现糖尿病特征性肝脏形态学改变。通络方剂治疗可显著降低上述血生化指标异常、明显改善肝脏病理形态,对糖尿病肝损害具有一定的治疗作用,其治疗剂量为2.0g／(kg·d)时疗效显著。2.糖尿病大鼠肝组织氧化应激水平增高,通络方剂可增强肝组织抗氧化酶类活性、清除脂质过氧化物,降低肝组织氧化应激水平。3.糖尿病大鼠糖脂代谢紊乱明显,通络方剂治疗未见明显降血糖、血脂作用。故分析通络方剂对糖尿病肝损害的治疗作用不依赖于其调节血糖血脂水平的效应,其机制与其抗氧化应激作用密切相关。