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桦褐孔菌多糖(IOP)是从传统中药桦褐孔菌当中提取、分离的多糖类成分，具有广泛的生物活性。本试验室前期研究表明，IOP具有显著的体内抗弓形虫和免疫增强等功能。但对于IOP的体外抗弓形虫机制研究尚不明确。因此，本试验将对IOP对于弓形虫速殖子体外感染的RAW264.7巨噬细胞中NF-κB和MAPK两个信号通路调控机制做研究。本试验将巨噬细胞RAW264.7作为试验对象，研究IOP对弓形虫感染的RAW264.7巨噬细胞中炎症因子表达水平及基因转录水平的影响。通过检测NF-κB以及MAPK信号途径中关键性蛋白的表达，从分子免疫水平探讨IOP的抗弓形虫免疫调控机制，为IOP的研发应用提供科学依据。 首先，本试验首先采用MTT法确定IOP的安全试验剂量。试验结果显示，0～180μg/mL的IOP无明显的细胞毒性作用(P＞0.05)。因此，本试验拟定IOP的高、中、低组中IOP的浓度分别为100μg/mL、50μg/mL和25μg/mL。ELISA法检测RAW264.7各组细胞培养液上清中相关炎症因子IL-1β、IL-4、IL-6、IFN-γ及TNF-α的表达调控水平。RT-PCR方法检测RAW264.7细胞相关炎症因子及趋化因子mRNA表达。激光共聚焦法检测IOP对NF-κB信号通路中细胞核转录因子AP-1(c-jun)和N-NF-κB p65活性的影响。Western-blot方法测定IOP对TLR2、TLR4及NF-κB信号转导通路关键蛋白p-IKKα/β、p-IκBα、C-NF-κB p65及N-NF-κB p65以及MAPK信号通路关键蛋白p-p38、p-JNK和p-ERK磷酸化表达水平的影响。 ELISA结果显示，IOP在一定程度上抑制相关炎症因子过度表达。给药组与模型组相比，细胞上清液中细胞因子IL-1β、IL-4、IL-6、IFN-γ和TNF-α均呈现下降趋势。RT-PCR结果显示，IOP在一定程度上呈剂量依赖性的抑制弓形虫感染RAW264.7细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α及趋化因子MIP-1α和MCP-1mRNA的过度表达。IOP可以在细胞转录水平上调控弓形虫感染的RAW264.7细胞中细胞因子及趋化因子mRNA表达，进而调控机体的免疫反应。本试验激光共聚焦结果显示，IOP能够剂量依赖性的抑制弓形虫感染的RAW264.7细胞中细胞核转录因子AP-1（c-jun）和N-NF-κB p65从细胞质解离向核内转移，从而发挥体外抗弓形虫的作用。Western-Blot结果显示，IOP能够剂量依赖性的上调弓形虫感染的RAW264.7细胞中C-NF-κB p65的表达，下调TLR2、TLR4、p-IKKα/β、p-IκBα、N-NF-κB p65以及MAPK信号通路关键蛋白p-p38、p-JNK和p-ERK蛋白的过度表达(P＜0.05或P＜0.01)。结果表明，IOP能够调控NF-κB信号通路中IKKα/β、IκBα、p38、JNK和ERK的过度磷酸化水平及TLR2、TLR4表达并调控NF-κB p65从胞浆向核中移位，从而发挥其抗弓形虫免疫作用。 综上试验结果表明，IOP在弓形虫感染的RAW264.7巨噬细胞中表现出抗弓形虫作用。IOP通过调控NF-κB和MAPK信号转导通路中信号因子的级联作用，调节细胞因子表达水平及mRNA表达和通路中关键蛋白表达，从而发挥其体外抗弓形虫作用。