NLK表达变化与结直肠癌诊断的相关性实验研究

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目的:探讨Nemo样激酶的表达与结直肠癌诊断的的临床应用价值材料与方法:为了研究NLK在结直肠癌发生发展中的作用,我们收集了406例结直肠癌组织标本,其中的50例新鲜冻存标本利用逆转录PCR、实时荧光定量PCR和Westorn Blot的方法检测NLK基因与蛋白在癌组织和正常组织中的表达情况,并通过免疫组化技术检测全部标本中NLK的表达水平,以此研究其与结直肠癌发生发展及生存率的相关性。结果:(一)NLK在正常黏膜组,癌组织和淋巴结转移组中的表达情况。正常黏膜组、大肠癌组和淋巴结转移组NLK阳性表达率分别为9.9%、57.6%、90.9%。将各组数据的均值进行比较,NLK的表达水平总体呈逐渐上升趋势,3组间差异有统计学意义(P<0.001)(二) RT-PCR westernblot检测NLK在相邻的正常黏膜组,癌组织中的表达(1) RT-PCR结果NLK DNA在相邻正常组织表达水平为(000094±0.000082)×106拷贝/ng DNA。 NLK DNA在癌组织中平均表达水平为(2.026667±0.624895)×106拷贝/ngDNA,明显高于对照组差异有统计学意义(P<0.001)(2) Western Blot结果在50组的免疫印迹结果中选取五组如图中所示,可以清楚的看到肿瘤组中蛋白条带清晰可见,而正常组条带明显暗淡甚至无条带出现,这说明NLK在结直肠癌组织中有明显表达,而正常组织中几乎无表达。综合50组的结果分析表明:肿瘤NLK的阳性表达率为66.0%,相邻正常组织表达率为18.0%,差异有统计学意义(P<0.01)(三)NLK表达水平与结直肠癌临床病理因素的关系(1)NLK的表达水平与淋巴结转移(P=0.001)、远处转移(P=0.000)、TNM分期(P=0.000)呈正相关;(2)NLK在低分化结直肠癌中的表达较低(P=0.019);(3)NLK在直肠癌中的表达水平明显高于结肠癌(P<0.01)。(4)NLK的表达与性别、年龄、癌症浸润深度及分化程度无明显相关性(四)NLK表达水平与大肠癌患者生存率的关系(1)NLK的表达水平与结直肠癌患者的总体生存率和无瘤生存率呈负相关(均P=0.000),(2)单因素分析显示,总体生存率与TNM分期、肿瘤部位、NLK表达水平相关,无瘤生存率与TNM分期、NLK表达水平相关(均P<0.01)(3)多因素分析显示,NLK高表达与黏液腺癌(P=0.029)、直肠癌(P=0.000)、和低分化(P=0.000)以及TNM分期(P=0.000)具有相关性(4)NLK高表达以及TNM分期(与患者较低的无瘤生存率(P=0.000)具有相关性结论:NLK的表达水平可以作为结直肠癌的发生发展以及预后的重要预测因子,具有一定的科研价值和应用前景。
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