【摘 要】
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背景多囊卵巢综合征（PCOS）是一种常见的、复杂的生殖内分泌紊乱性疾病,临床主要表现为稀发排卵或不排卵、多毛、痤疮、肥胖等。现研究表明卵母细胞的质量是影响胚胎发育的关键性因素。Micro RNA（miRNA）作为表观遗传学领域的分支,具有间接调节基因表达的能力,在调控发育过程中起着不可或缺的作用。多项研究表明miR-320（miR-320a）在PCOS患者血液、卵泡液、颗粒细胞、外泌体中异常表达,
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背景多囊卵巢综合征（PCOS）是一种常见的、复杂的生殖内分泌紊乱性疾病,临床主要表现为稀发排卵或不排卵、多毛、痤疮、肥胖等。现研究表明卵母细胞的质量是影响胚胎发育的关键性因素。Micro RNA（miRNA）作为表观遗传学领域的分支,具有间接调节基因表达的能力,在调控发育过程中起着不可或缺的作用。多项研究表明miR-320（miR-320a）在PCOS患者血液、卵泡液、颗粒细胞、外泌体中异常表达,人卵泡液miR-320的水平可作为评估胚胎质量的指标,干扰小鼠卵母细胞miR-320表达影响早期胚胎发育。目的研究PCOS患者颗粒细胞、PCOS小鼠颗粒细胞和卵母细胞中miR-320-3p的表达情况;检测早期胚胎的靶基因、多能性基因的表达,并对早期胚胎进行转录组测序,初步探究PCOS中miR-320-3p低表达对胚胎发育潜能影响的相关分子机制。方法1、采用q RT–PCR方法检测miR-320-3p人颗粒细胞中的表达。2、皮下注射脱氢表雄酮建立PCOS小鼠模型。3、q RT–PCR方法检测miR-320-3p在小鼠颗粒细胞和MⅡ卵母细胞中的表达。4、小鼠卵母细胞胞质内注射miR-320-3p mimics或NC并分组:对照+NC组、PCOS+NC组、PCOS+模拟物组（miR-320-3p mimics）;注射后进行体外受精及培养,记录4-细胞期胚胎和囊胚的数量。5、囊胚进行滋养外胚层分子标志物CDX2染色和TUNEL细胞凋亡检测,对各组总细胞数、滋养外胚层（TE）细胞数、内细胞团（ICM）细胞数和凋亡细胞数进行计数。6、q RT-PCR方法检测4-细胞胚胎中miR-320-3p的靶基因和胚胎发育相关的多能性基因的表达变化。7、小鼠4-细胞胚胎中m RNAs的差异性表达进行转录组测序和生物信息学分析,q RT-PCR方法对差异基因进行验证。8、使用SPSS 25.0软件对数据进行统计分析。结果1、与对照组患者相比,PCOS患者卵泡液颗粒细胞中miR-320-3p表达下调（P＜0.05）。2、与对照组小鼠相比,PCOS组小鼠动情周期紊乱,多处于发情期和发情间期;PCOS组小鼠卵巢组织切片显示卵泡数目明显增多,部分卵泡有囊性扩张,颗粒细胞排列松散且不规则,黄体明显减少。3、PCOS组小鼠颗粒细胞、MⅡ期卵母细胞中miR-320-3p表达下调（P＜0.05）。4、与对照+NC组相比,PCOS+NC组囊胚率显著降低,与PCOS+NC组相比,PCOS+模拟物组囊胚率显著升高（P＜0.05）。5、对照+NC组与PCOS+模拟物组的总细胞数、TE细胞数、ICM细胞数均显著多于PCOS+NC组,凋亡细胞数明显少于PCOS+NC组（P＜0.05）。6、与对照+NC组与PCOS+模拟物组相比,Ulk1、Pbx3、Myc、Dppa3在PCOS+NC组4-细胞胚胎中表达显著下调,Kdm5b、Stab2表达显著上调（P＜0.05）;与对照+NC组相比,Wdr5在PCOS+NC组和PCOS+模拟物组中均表达上调（P＜0.05）。7、4-细胞胚胎转录组测序:对照+NC组和PCOS+NC组4-细胞胚胎中差异基因有242个,PCOS+NC组和PCOS+模拟物组4-细胞胚胎中差异基因有94个。其中25个差异基因于PCOS+NC组中表达异常,在PCOS+模拟物组中表达水平得到恢复,趋向对照+NC组的表达水平。与对照+NC组与PCOS+模拟物组相比,Vrk2、Ptpn3、Kitl、Reep3在PCOS+NC组4-细胞胚胎中表达上调,Meterf2、Ampd1、Il1rap表达下调（P＜0.05）。结论PCOS患者颗粒细胞和PCOS小鼠颗粒细胞、卵母细胞miR-320-3p的表达下调;PCOS小鼠卵母细胞中miR-320-3p低表达影响胚胎植入前发育,可反应卵母细胞和胚胎的质量。PCOS卵中补偿miR-320-3p能够改善胚胎发育潜能,提高胚胎质量。
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