流动—酶催化化学发光新体系的研究与应用

来源 :南昌大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:leeyongfan
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本文综述部分简要介绍了化学发光分析的基本情况、发展以及应用。流动化学发光分析法具有仪器设备简单、分析速度快、灵敏度高、线性范围宽等优点,所以越来越受到分析化学工作者的重视。本文基于鲁米诺-过氧化氢体系的化学发光现象,以辣根过氧化物酶(HRP)和血红蛋白(Hb)作为酶催化剂,采用固定化酶和可更新表面联用流动注射等技术,建立了测定抗坏血酸、胆固醇及免疫球蛋白G的流动注射化学发光分析法。研究报告包括以下三部分:1.基于抗坏血酸对Luminol-HRP-H2O2体系化学发光反应的抑制作用,结合固定化酶技术,建立了一种简单、快速检测抗坏血酸的流动注射化学发光分析新方法。该方法线性范围为4.0×10-8~4.0×10-4mol/L,检测限为1.6×10-8mol/L。2.利用血红蛋白(Hb)作为模拟酶催化H2O2与鲁米诺的化学发光反应,将该反应与胆固醇氧化酶(COD)催化氧化胆固醇生成H2O2的反应偶合,联用流动注射分析技术,建立了测定胆固醇的流动注射化学发光分析法。该方法用于测定人体血清中的游离胆固醇及总胆固醇含量,结果令人满意。进样频率为30个/小时,游离胆固醇线性范围为5.6×10-7mol·L-1~3.8×10-5mol·L-1,检测限为3.0×10-7mol·L-1;总胆固醇线性范围为1.1×10-6mol·L-1~4.3×10-5mol·L-1,检测限为1.5×10-7mol·L-1。3.将羊抗人IgG抗体(第一抗体)固定于包被有蛋白A的Sepharose 4B FastFlow凝胶微珠表面制成固相抗体,用辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗人IgG抗体作为第二抗体,在自制的微型流通式反应器中与人IgG进行免疫反应生成双抗体夹心式抗原-抗体复合物。该复合物中含有的HRP能够催化发光底物增强化学发光,其发光强度与人体血清中IgG的含量成良好的线性关系。由于包被有蛋白A的Sepharose 4FF凝胶微珠颗粒非常小(45-165μm),每次测定所需的第一抗体随包被有蛋白A的Sepharose 4FF凝胶微珠进入微型流通式反应器中,完成一次测定后微珠即随废液一起排出。从而用自制的微型流通式反应器建立了流动注射可更新表面非均相增强化学发光免疫法测定人体血清中的免疫球蛋白G的新方法。体系经优化后,检出限为0.01mg/L,分析速率达到10次/h,校正曲线的线性范围为0.05~3.0mg/L。本法已成功地应用于人血清中IgG的测定。
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